GOST 10444.11 के अनुसार लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों की सामग्री का निर्धारण। उपकरण, सामग्री और अभिकर्मक

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अंतरराज्यीय मानक

खाद्य उत्पाद

लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों के निर्धारण के लिए तरीके

आधिकारिक प्रकाशन

मानकसूचना

समूह H09

यूडीसी 663/.665.3.001.4:006.354

अंतरराज्यीय

मानक

खाद्य उत्पाद लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों के निर्धारण के तरीके

खाद्य उत्पाद। लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया के निर्धारण के लिए तरीके

गोस्ट

10444.11-89

एमकेएस 07.100.30 ओकेएसटीयू 9109

परिचय दिनांक 01/01/91

यह मानक विशिष्ट और किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर संस्कृतियों, जीवाणु सांद्रता और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी पर लागू होता है और व्यवहार्य लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों और उनकी सबसे संभावित शुद्धता (एमपीपी) निर्धारित करने के लिए एक विधि स्थापित करता है। साथ ही विशिष्ट उत्पादों (डेयरी उत्पादों, स्टार्टर कल्चर, बैक्टीरियल सांद्रण और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की बैक्टीरियल तैयारी को छोड़कर) में लैक्टोबैसिलस और ल्यूकोनोस्टोक जेनेरा के बैक्टीरिया के निर्धारण के तरीके। ग्रुप एन स्ट्रेप्टोकोक्की स्ट्रेप्टोकोकस। पेडियोकोकस। एस थर्मोफिलस और लैक्टोबैसिलस के सबसे संभावित शुद्ध (एमपी) बैक्टीरिया का निर्धारण।

यह विधि उत्पाद की एक निश्चित मात्रा को बोने और (या) इसे तरल या अगर चयनात्मक पोषक माध्यम में पतला करने, इष्टतम परिस्थितियों में फसलों की खेती करने आदि पर आधारित है। यदि आवश्यक हो, तो पता लगाए गए सूक्ष्मजीवों के रूपात्मक और जैव रासायनिक गुणों का निर्धारण करना और उनकी गिनती करना।

यह विधि इसके लिए अभिप्रेत है:

विनियामक और तकनीकी दस्तावेज़ीकरण की आवश्यकताओं के साथ खाद्य और किण्वित उत्पादों, स्टार्टर संस्कृतियों, जीवाणु सांद्रता और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी के सूक्ष्मजीवविज्ञानी गुणवत्ता संकेतकों का अनुपालन स्थापित करना;

डिब्बाबंद भोजन की औद्योगिक बाँझपन स्थापित करना:

खाद्य दोषों के कारणों की पहचान करना।

1. नमूना चयन और तैयारी

1.1. GOST 26668 के अनुसार, किण्वित दूध को छोड़कर, खाद्य उत्पादों के नमूनों का चयन और तैयारी। 26669.

किण्वित दूध उत्पादों (सूखा और तरल), स्टार्टर कल्चर, जीवाणु सांद्रण और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी का नमूना लेना और उन्हें विश्लेषण के लिए तैयार करना - GOST 9225 1 2 के अनुसार।

1.2. डिब्बाबंद भोजन की जाँच लीक के लिए की जाती है - GOST 8756.18 के अनुसार।

पूर्ण डिब्बाबंद भोजन, दिखने में सामान्य, कम से कम 5 दिनों के लिए 1 डीएम 3 तक की क्षमता वाले कंटेनरों में परीक्षण से पहले 30-37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टेट किया जाता है। 1 डीएम 3 से अधिक की क्षमता वाले रैप में - कम से कम 7 हस्ताक्षर

खाद्य उत्पाद जिनमें लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों की संख्या मानकीकृत है, थर्मोस्टेटिंग के अधीन नहीं हैं।

GOST 26669 के अनुसार पेप्टोन-सलाइन समाधान का उपयोग करके उत्पाद तनुकरण तैयार किया जाता है।

5% से अधिक NaCI के द्रव्यमान अंश वाले उत्पादों का प्रारंभिक तनुकरण पेप्टोन पानी का उपयोग करके तैयार किया जाता है; मछली और मांस उत्पादों का प्रारंभिक पतलापन खारे घोल का उपयोग करके तैयार किया जाता है।

गोस्ट आर 53430 - 2009।

2. उपकरण, सामग्री और अभिकर्मक

परीक्षण करने के लिए GOST 10444.1 के अनुसार उपकरण, सामग्री और अभिकर्मकों का उपयोग किया जाता है। GOST 9225 और नीचे सूचीबद्ध:

GOST 24104 3 के अनुसार मेट्रोलॉजिकल विशेषताओं के साथ सामान्य प्रयोजन प्रयोगशाला स्केल। 200 ग्राम तक की सबसे बड़ी वजन सीमा और ±2 मिलीग्राम (अभिकर्मकों के वजन के लिए) की अनुमेय त्रुटि सीमा के साथ:

GOST 24104 3 के अनुसार मेट्रोलॉजिकल विशेषताओं के साथ सामान्य प्रयोजन प्रयोगशाला स्केल। 200 ग्राम तक की अधिकतम वजन सीमा और ±15 मिलीग्राम (उत्पाद के वजन के लिए) की अनुमेय त्रुटि सीमा के साथ;

चरण-विपरीत माइक्रोस्कोपी या अन्य समान ब्रांडों के लिए एक उपकरण के साथ जैविक प्रकाश माइक्रोस्कोप: GOST 6672 के अनुसार कवरस्लिप्स; GOST 9284 के अनुसार ग्लास स्लाइड:

28-55 3 C के ऑपरेटिंग तापमान रेंज वाला थर्मोस्टेट आपको ± 1 'C की त्रुटि के साथ निर्धारित तापमान बनाए रखने की अनुमति देता है; GOST 5541 के अनुसार कॉर्क प्लग;

फोल्डिंग पॉकेट आवर्धक कांच, GOST 25706 के अनुसार 4-10 गुना आवर्धन देता है; बैक्टीरिया और वायरस की तैयारी के लिए पैनक्रिएटिन: GOST 20015 के अनुसार तकनीकी क्लोरोफॉर्म;

गाय के दूध से प्राप्त 19"टी से अधिक अम्लता वाला स्किम्ड दूध, GOST 13264 4 के अनुसार कम से कम 2 ग्रेड तैयार किया गया या GOST 10970 5 के अनुसार स्किम्ड मिल्क पाउडर; एल-आर्जिनिन हाइड्रोक्लोराइड; बेंज़िडाइन बेसिक या हाइड्रोक्लोरिक एसिड; पोटेशियम साइट्रेट: कार्बोक्जिलिक या मिल्ड आई त्से;

मैग्नीशियम सल्फेट (MgS0 4 7H 2 0);

मैंगनीज सल्फेट (MnS0 4 2H 2 0);

मैंगनीज सल्फेट (MnS0 4 4H 2 0);

सौरबिक तेजाब:

निग्रोसिन;

3. परीक्षण के लिए तैयारी

3.1. खाद्य उत्पादों के परीक्षण के लिए अभिकर्मकों और संकेतकों के समाधान की तैयारी (किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर संस्कृतियों, जीवाणु सांद्रता और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी को छोड़कर)

3.1.1. ब्रोमोक्रेसोल पर्पल इंडिकेटर, 1 ग्राम/डीएम3 की द्रव्यमान सांद्रता वाला घोल: 0.1 ग्राम ब्रोमोक्रेसोल पर्पल, एसेप्टिस के नियमों के अनुपालन में, स्थानांतरित किया जाता है, बाँझ आसुत जल से धोया जाता है, 100 सेमी3 की क्षमता वाले एक मापने वाले कंटेनर में, और मात्रा को उसी पानी से निशान के अनुसार समायोजित किया जाता है। समाधान को कमरे के तापमान पर 3 महीने से अधिक समय तक संग्रहीत नहीं किया जाता है।

3.1.2. कैल्शियम कार्बोनेट, 30 ग्राम/डीएम3 की द्रव्यमान सांद्रता वाला जलीय निलंबन: 3 ग्राम कैल्शियम कार्बोनेट, GOST 10444.1 के अनुसार निष्फल। स्थानांतरण, आसुत जल से धोकर, 100 सेमी 3 की क्षमता वाले एक मापने वाले कंटेनर में, मात्रा को निशान के अनुसार समायोजित करें। सस्पेंशन को 20 मिनट के लिए (12111) 3 C के तापमान पर निष्फल किया जाता है। सस्पेंशन को कमरे के तापमान पर 3 महीने से अधिक समय तक संग्रहीत नहीं किया जाता है।

3.1.3. कार्बोल्फुचिन। संकेंद्रित घोल: 1 ग्राम फुकसिन को 96% एथिल अल्कोहल के 10 सेमी 3 और 50 ग्राम/डीएम 3 की द्रव्यमान सांद्रता के साथ फिनोल समाधान के 100 सेमी 3 के साथ मिलाया जाता है।

कार्बोल्फुचिन का कार्यशील घोल तैयार करने के लिए, कार्बोल्फुचिन के सांद्रित घोल की 10 इकाइयों में 90 सेमी3 आसुत जल मिलाएं।

3.1.4. 10 ग्राम/डीएम3 की द्रव्यमान सांद्रता के साथ क्रिस्टल वायलेट घोल: क्रिस्टल वायलेट के 1 ग्राम को आसुत जल से धोकर 100 सेमी3 मापने वाले कप में स्थानांतरित किया जाता है, मात्रा को निशान के अनुसार समायोजित किया जाता है। घोल को 3 महीने से अधिक समय तक संग्रहीत किया जाता है कमरे के तापमान पर।

3.1.5. 100 ग्राम/डीएम की द्रव्यमान सांद्रता के साथ निग्रोसिन निलंबन: 10 ग्राम निग्रोसिन को 100 सेमी3 की क्षमता वाले एक मापने वाले कंटेनर में स्थानांतरित किया जाता है और 45 के तापमान पर गर्म किया जाता है -50*C पानी के स्नान में, फिर सूती धुंध के माध्यम से छान लें।

3.1.6. GOST 26669 के अनुसार पेप्टोन-नमक समाधान तैयार किया जाता है।

3.1.7. पेप्टोन पानी GOST 26669 के अनुसार तैयार किया जाता है।

3.1.8. सॉर्बिक एसिड, रेशम का घोल: 1 ग्राम सॉर्बिक एसिड को NaOH = 1 mol/dm 3 के साथ सोडियम पाइरोक्साइड के घोल से धोकर 100 सेमी 3 की क्षमता वाले एक मापने वाले कंटेनर में स्थानांतरित किया जाता है। वॉल्यूम को उसी समाधान के साथ निशान पर समायोजित किया जाता है। परिणामी घोल को GOST 26670 के अनुसार झिल्ली निस्पंदन द्वारा निष्फल किया जाता है।

इसे अपूतिता के नियमों के अनुपालन में बिना निस्पंदन के सॉर्बिक एसिड का घोल तैयार करने की अनुमति है। इस मामले में, बाँझ आसुत जल में सोडियम पाइरोक्साइड का घोल तैयार किया जाता है।

3.1.9. साइटोक्रोम के निर्धारण के लिए अभिकर्मक: 1 ग्राम बेंजिडाइन बेसिक या हाइड्रोक्लोरिक एसिड को 99.8% ग्लेशियल एसिटिक एसिड के 20 सेमी 3 में घोला जाता है, 30 सेमी 3 आसुत जल मिलाया जाता है और धीरे-धीरे गर्म किया जाता है, ठंडा होने के बाद, 96% एथिल के 50 सेमी 3 को मिलाया जाता है। घोल में अल्कोहल मिलाया जाता है और घोल को 1 महीने के लिए रेफ्रिजरेटर में रख दिया जाता है।

3.1.10. खारा घोल GOST 10444.1 के अनुसार तैयार किया जाता है।

3.2. विशिष्ट उत्पादों के परीक्षण के लिए पोषक तत्व मीडिया की तैयारी (किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर संस्कृतियों, जीवाणु सांद्रता और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी को छोड़कर)

3.2.1. ब्लैंकफेल्ट का सघन माध्यम GOST 10444.1 के अनुसार तैयार किया गया है।

3.2.2. मीडियम" ब्लिकफेलिला तरल: 10 ग्राम लैक्टोज को 950 सेमी3 तरलीकृत पानी में घोला जाता है। 10 ग्राम ग्लूकोज, 5 ग्राम पेप्टोन, उबालें और पेपर फिल्टर से छान लें। छानने में 20 सेमी 3 खमीर अर्क मिलाया जाता है। 3.1.1 के अनुसार ब्रोमोक्रेसी बेर पर्पल का 32 सेमी 3 घोल। पाई 17.3±0.1 सेट करें। स्टेराइल टेस्ट ट्यूब में डालें और 20 मिनट के लिए (117±1) *C के तापमान पर स्टेरलाइज़ करें।

3.2.3. बुधवार ब्रिग्स, शैरी द्वारा संशोधित:

875 सेमी 3 आसुत जल में 15 ग्राम पेप्टोन मिलाया जाता है। 20 ग्राम ग्लूकोज. 25 सेमी 3 खमीर अर्क, 5 ग्राम सोडियम एसीटेट। 5 ग्राम पोटेशियम फॉस्फेट मोनोप्रतिस्थापित। 2 ग्राम अमोनियम साइट्रिक एसिड। 100 सेमी 3 टमाटर का रस (यह मानते हुए कि रस में कम से कम 4.5% घुलनशील ठोस पदार्थ हैं, यदि टमाटर के रस में अलग मात्रा में शुष्क पदार्थ हैं, तो 4.5% की शुष्क पदार्थ सामग्री पर पुनर्गणना करें)। 1 सेमी 3 रहस्य - 80. 5 सेमी 3 नमक घोल (MgS0 4 7H; 0 -11.5 ग्राम। MnS0 4 4H 2 0 - 2.86 ग्राम, FeS0 4 7H 2 0 - 0.68 ग्राम, आसुत जल 100 सेमी 3 तक), 15 जी आगर.

मिश्रण को धीमी आंच पर तब तक उबाला जाता है जब तक कि आगर पूरी तरह से घुल न जाए। पीएच सेट करें ताकि स्टरलाइज़ेशन के बाद यह 25*C (6.510.1) पर रहे। माध्यम को 15 मिनट के लिए (115 ± 1) *C के तापमान पर रोगाणुरहित किया जाता है।

3.2.4. खमीर माध्यम: GOST 10444.1 के अनुसार तैयार 100 सेमी 3 खमीर अर्क। 900 सेमी 3 आसुत जल डालें। GOST 10444.1 के अनुसार 10 ग्राम निष्फल कैल्शियम कार्बोनेट और 100 ग्राम सुक्रोज। सुक्रोज के घुलने तक मिश्रण को गर्म किया जाता है और पीएच को इस तरह से समायोजित किया जाता है। ताकि स्टरलाइज़ेशन के बाद यह 25'C (7.1 ± 0.1) पर हो। 10 सेमी 3 की टेस्ट ट्यूब में डालें और तापमान पर स्टरलाइज़ करें< 121 ± 1) ‘С в течение 15 мин.

3.2.5. पत्तागोभी अगर मीडियम GOST 10444.1 के अनुसार तैयार किया जाता है।

3.2.6. एमआरएस माध्यम तरल है: 10 ग्राम पेप्टोन को 1.0 डीएम 3 की क्षमता वाले वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में रखा जाता है। 20 सेमी 3 खमीर अर्क। 20.0 ग्राम ग्लूकोज, 1.0 सेमी 3 ट्वीन - 80, 2.0 ग्राम अप्रतिस्थापित पोटेशियम फॉस्फेट। 5.0 ग्राम सोडियम एसीटेट, 2.0 ग्राम ट्रायमोनियम साइट्रेट, 0.2 ग्राम मैग्नीशियम सल्फेट, 0.05 ग्राम मैंगनीज सल्फेट (MnS0 4 4H 2 0)। निशान पर मांस का पानी डालें; पानी के स्नान में गर्म करके घटकों को घोलें और पीएच सेट करें ताकि स्टरलाइज़ेशन के बाद यह 25 डिग्री सेल्सियस (6.210.1) पर हो। माध्यम को 10 सेमी 3 के स्टेराइल टेस्ट ट्यूब में डाला जाता है और एक आटोक्लेव में तापमान पर स्टरलाइज़ किया जाता है। (12111) डिग्री सेल्सियस 15 मिनट के लिए। पोषक माध्यम वाले टेस्ट ट्यूबों को (411) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 30 डिग्री से अधिक नहीं संग्रहित किया जाता है।

3.2.7. अन्य एमआरएस एगरिज़ोव माध्यम खंड 3.2.6 में निर्दिष्ट नुस्खा के अनुसार तैयार किया जाता है। 15-18 लून जोड़ने के साथ। घटकों को घोलने के बाद, माध्यम को बाँझ फ्लास्क में डाला जाता है और 15 मिनट के लिए (12111) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है। तैयार माध्यम को 30 दिनों से अधिक के लिए (411) *C के तापमान पर संग्रहीत किया जाता है .

यदि आवश्यक हो, तो चयनात्मकता बढ़ाने के लिए, नसबंदी के बाद, एगर या तरल माध्यम के 1 डीएम3 में सॉर्बिक एसिड नंबर का 1 सेमी 3 क्षारीय घोल मिलाएं। 3.1.8.

3.2.8. पीएच 9.6 के साथ मध्यम मांस-पेप्टोन शोरबा:

और मांस-पेंटन शोरबा GOST 10444.1 के अनुसार तैयार किया गया। GOST 10444.1 के अनुसार क्षार और एसिड समाधान का उपयोग करके पीएच को समायोजित किया जाता है ताकि नसबंदी के बाद यह 25 डिग्री सेल्सियस पर 9.6 हो। माध्यम को 20 मिनट के लिए (121 ± I) * C के तापमान पर निष्फल किया जाता है।

3.2.9. 6.5% सोडियम क्लोराइड युक्त मांस-पेप्टोन शोरबा माध्यम GOST के अनुसार तैयार किया जाता है

10444.1, लेकिन तैयारी के दौरान माध्यम के प्रति 1 डीएम 3 में अतिरिक्त सोडियम क्लोराइड की मात्रा 65 ग्राम तक बढ़ा दें।

3.2.10. सुक्रोज के साथ पोषक तत्व अगर माध्यम:

मांस-नेप्टोन शोरबा के 1 डीएम 3 में 100.0 ग्राम सुक्रोज, 15.0 ग्राम अगर मिलाया जाता है, कभी-कभी हिलाया जाता है। मिश्रण को उबालने के लिए गर्म किया जाता है और सभी घटक पूरी तरह से घुल जाते हैं।

माध्यम को 45-55 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा किया जाता है और पीएच को समायोजित किया जाता है ताकि नसबंदी के बाद यह 25 डिग्री सेल्सियस (7.1 ± 0.1) पर हो।

माध्यम को फ्लास्क में डाला जाता है और (121 ± 1) * सी के तापमान पर 15 मिनट के लिए निष्फल किया जाता है। स्टरलाइज़ेशन और पीएच की जाँच के बाद, माध्यम को अच्छी तरह मिलाया जाता है और पेट्री डिश में डाला जाता है, (4 ± 1) * C के तापमान पर 14 दिनों से अधिक नहीं रखा जाता है।

3.2.11. रेड्डी का माध्यम: आधार माध्यम - 500 सेमी 3 आसुत जल वाले फ्लास्क में 15.0 ग्राम अगर डालें और पानी के स्नान में तब तक गर्म करें जब तक कि आगर घुल न जाए। 500 सेमी 3 आसुत जल वाले एक अन्य फ्लास्क में, 10.0 ग्राम पोटेशियम साइट्रेट और 15.0 ग्राम कार्बोक्सिल मिथाइल सेलुलोज डालें और गर्म करके घोलें। दोनों फ्लास्क की सामग्री को मिलाया जाता है और 3.0 ग्राम पेप्टोन और 25 सेमी 3 खमीर अर्क मिलाया जाता है। 1.25 ग्राम पोटैशियम (1us<1юрнокнслого двузамешенною. 5.0 г L-аргинин гидрохлорида. нагревают на водяной бане до полного растворения компонентов, охлаждают до температуры 45-55 "С и устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 "С (6.310.2). Основу среды стерилизуют при температуре < 121 ± 1) "С в течение 15 мин и хранят при температуре (4±1) *С не более 30 суг.

पोषक तत्व माध्यम तैयार करने के लिए, 5.0 सेमी 3 बाँझ स्किम दूध को 1 डीएम 3 पिघले हुए में मिलाया जाता है और आधार से 45-55 इंच तक ठंडा किया जाता है। 30 ग्राम/डीएम की द्रव्यमान सांद्रता के साथ कैल्शियम कार्बोनेट के 100 सेमी 3 निलंबन I g/dm 3 की द्रव्यमान सांद्रता के साथ ब्रोमोक्रेसोल पर्पल के घोल का 3 और 2 सेमी 3।

3.2.12. लिक्विड कैटेल मीडियम: 1.0 डीएम 3 वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में 10.0 ग्राम पेप्टोन मिलाएं।

25.0 सेमी 3 खमीर अर्क। 20.0 ग्राम ग्लूकोज. 1.0 सेमी 3 रहस्य - 80. 6.0 ग्राम पोटेशियम फॉस्फेट मोनोप्रतिस्थापित, 2.0 ग्राम अमोनियम साइट्रेट, 25.0 ग्राम सोडियम एसीटेट। 1.32 सेमी 3 ग्लेशियल एसिटिक एसिड, 0.575 ग्राम मैग्नीशियम सल्फेट। 0.12 ग्राम मैंगनीज सल्फेट (MnS0 4 2GPO), 0.034 ग्राम आयरन सल्फेट, निशान पर आसुत जल मिलाएं, पानी के स्नान में उबालकर घटकों को घोलें और पीएच को समायोजित करें ताकि नसबंदी के बाद यह 25 "C (5.410) पर हो। 1) माध्यम को बाँझ परीक्षण ट्यूबों में 10 सेमी 3 डाला जाता है और 15 मिनट के लिए (12111) *C के तापमान पर एक आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है, पोषक माध्यम के साथ परीक्षण ट्यूबों को (411) *C के तापमान पर संग्रहीत किया जाता है 30 डिग्री से अधिक नहीं.

3.2.13. गैरेज्ड कैटेल मीडियम i में वर्णित रेसिपी के अनुसार तैयार किया जाता है। 3.2.12. जोड़ के साथ

20.0 ग्राम आगर. घटकों को घोलने के बाद, माध्यम को बाँझ फ्लास्क में डाला जाता है और 15 मिनट के लिए (12111) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है। तैयार माध्यम को (411) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 30 डिग्री से अधिक नहीं संग्रहित किया जाता है।

3.2.14. माध्यम GOST 10444.1 के अनुसार टमाटर के रस से तैयार किया जाता है।

3.2.15. स्यूडोकैटलेज़ के निर्धारण के लिए माध्यम: 1 डीएम3 की क्षमता वाले वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में 3 जोड़ें

5.0 पेप्टोन. 25 सेमी 3 खमीर अर्क। 0.5 सेमी 3 बीच - 80. 0.1 ग्राम (एमएनएस0 4 4एच>0)। 0.5 ग्राम ग्लूकोज. 15 लूनों को मांस शोरबा के साथ ऊपर रखा जाता है, घटकों को पानी के स्नान में गर्म करके भंग कर दिया जाता है और पीएच को समायोजित किया जाता है ताकि नसबंदी के बाद यह 25 * C (6.910.1) पर हो। माध्यम को 5-7 सेमी 3 की टेस्ट ट्यूब में डाला जाता है और 15 मिनट के लिए (12111) * C के तापमान पर एक आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है। स्टरलाइज़ेशन के बाद, शॉल्स प्राप्त करने के लिए ट्यूबों को एक झुकी हुई सतह पर रखा जाता है।

3.2.16. ली पर्यावरण:

माध्यम का आधार - 1 डीएम 3 की क्षमता वाले वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में 10.0 ग्राम पेप्टोन मिलाएं। 50 सेमी 3 खमीर अर्क। 5.0 ग्राम लैक्टोज, 3.0 ग्राम कैल्शियम कार्बोनेट, GOST 10444.1 के अनुसार निष्फल, 0.5 ग्राम Na 2 HP() 4. 18 ग्राम अगर, आसुत जल को निशान में मिलाएं, पानी के स्नान में रगड़कर घटकों को घोलें और पीएच को समायोजित करें ताकि नसबंदी के बाद यह 25 डिग्री सेल्सियस (7.011) के तापमान पर एक आटोक्लेव में निष्फल हो जाए (12111) * 20 मिनट के लिए और यदि आवश्यक हो, तो (411) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 30 दिनों से अधिक न रखें।

पोषक तत्व माध्यम तैयार करने के लिए, आधार के 1 ग्राम/डीएम 3 से 1 डीएम 3 की द्रव्यमान सांद्रता के साथ ब्रोमोक्रेसोल पर्पल के बाँझ समाधान के 20 सेमी 3 जोड़ें, मिश्रण करें और पेट्री डिश में डालें। माध्यम को (4±1) *C के तापमान पर 7 दिनों से अधिक संग्रहीत नहीं किया जाता है।

3.3. सिस्ट उत्पादों, स्टार्टर कल्चर, जीवाणु सांद्रण और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी के परीक्षण के लिए पोषक तत्व मीडिया की तैयारी

3.3.1. लकवाग्रस्त दूध की तैयारी

प्राकृतिक या पुनर्गठित मलाई रहित दूध को 20 मिनट तक उबाला जाता है या बहती भाप से उपचारित किया जाता है और ठंडा किया जाता है! (45±2) "C के तापमान पर। सक्रिय अम्लता को 40 NaOH के द्रव्यमान अंश के साथ एक जलीय घोल जोड़कर pH (7.7±0.1) पर लाया जाता है। 1000 सेमी" दूध में 0.5 से 1.0 तक मिलाया जाता है। पैनक्रिएटिन पाउडर का ग्राम। फिर दूध में 5 से 6 सेमी 3 क्लोरोफॉर्म मिलाया जाता है। फ्लास्क को कॉर्क स्टॉपर से बंद कर दिया जाता है और पहले 3-5 घंटों के दौरान दूध को 18-24 घंटों के लिए (4012) * C के तापमान पर रखा जाता है 2-3 बार हिलाएं (क्लोरोफॉर्म निकालने के लिए हिलाने के बाद स्टॉपर को थोड़ा सा खोल दिया जाता है)।

फिर हाइड्रोलाइज्ड दूध को एक पेपर फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है और 1: 1 के अनुपात में आसुत जल से पतला किया जाता है। सक्रिय अम्लता पीएच (7.110.1) स्थापित करें। NaOH 40% के द्रव्यमान अंश के साथ एक जलीय घोल मिलाएं और हाइड्रोलाइज्ड दूध के साथ अगर तैयार करने के लिए इसका उपयोग करें। भंडारण के मामले में, हाइड्रोलाइज्ड उत्पाद को 15 मिनट के लिए (121 ± 1) * C के तापमान पर एक आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है।

3.3.2. हाइड्रोलाइज्ड क्वीन अगर की तैयारी

हाइड्रोलाइज्ड दूध, सेमी 3 - 1000:

आगर, जी - 15.

1000 सेमी 3 ग्राम लकवाग्रस्त रानी में 15 लून मिलाएं। माध्यम को तब तक गर्म किया जाता है जब तक कि एगर पूरी तरह से पिघल न जाए और रूई के माध्यम से फ़िल्टर न हो जाए, टेस्ट ट्यूब या फ्लास्क में डाला जाए और (12111) * C के तापमान पर (1011) मिनट के लिए एक आटोक्लेव में निष्फल कर दिया जाए।

3.3.3. बाँझ वसा रहित दूध तैयार करना

प्राकृतिक या पुनर्गठित कम वसा वाले कम वसा वाले भोजन को 10 सेमी 3 ट्यूबों में डाला जाता है और (12111) 'C के तापमान पर (1011) मिनट के लिए निष्फल किया जाता है।

4. परीक्षण का संचालन

4.1. खाद्य उत्पादों का परीक्षण (किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर कल्चर, जीवाणु सांद्रण और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी को छोड़कर)

4.1.1. सूक्ष्मजीवों का निर्धारण करने के लिए, उत्पाद के उप-योक नमूने या उसके मूल तनुकरण का उपयोग करें।

पेट्री डिश पर सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति निर्धारित करने और उनकी संख्या की गणना करने के लिए, किसी विशिष्ट उत्पाद के नमूने से या किसी विशिष्ट के लिए नियामक और तकनीकी दस्तावेज में निर्दिष्ट सूक्ष्मजीवों की अनुमेय संख्या के अनुसार प्रारंभिक कमजोर पड़ने की एक श्रृंखला तैयार की जाती है। विशिष्ट उत्पाद का प्रकार.

एनएफपी की गणना करने के लिए, एक विशिष्ट उत्पाद के नमूने से प्रारंभिक और दस गुना तनुकरण की एक श्रृंखला इस तरह से तैयार की जाती है कि उच्चतम तनुकरण वाली फसलों में सूक्ष्मजीवों का पता नहीं चलता है। बुआई के लिए, कम से कम तीन क्रमिक तनुकरणों का चयन किया जाता है। प्रत्येक तनुकरण से तीन समानांतर ट्यूबों को टीका लगाया जाता है।

4.1.2. डी1आई को एनएचएफ विधि का उपयोग करके तरल मीडिया में बोया जाता है और तैयार उत्पाद के नमूने का 1.0 सेमी और (या) सतही विधि का उपयोग करके पेट्री डिश पर बुवाई के लिए गहरी विधि का उपयोग करके पतला किया जाता है, 0.1-0.2 सेमी 3 लिया जाता है .

गहरी या सतही विधियों के साथ-साथ झिल्ली निस्पंदन का उपयोग करके बुवाई GOST 26670 के अनुसार की जाती है।

झिल्ली फ़िल्टर विधि का उपयोग करते समय, तरल उत्पाद की मात्रा फ़िल्टर की जाती है, जो एक विशिष्ट विशिष्ट उत्पाद के लिए नियामक और तकनीकी दस्तावेज़ीकरण में इंगित की जाती है।

4.1.3. कम आवृत्ति वाले लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति या गिनती निर्धारित करने के लिए, पीआई में संकेतित तरल मीडिया में से एक पर टीकाकरण किया जाता है। 3.2.2. 3.2.6 या 3.2.12.

यदि, उत्पाद को ब्लैंकफेलैट माध्यम में जोड़ने के बाद, माध्यम का रंग बदल जाता है, तो मूल रंग बहाल होने तक 50 ग्राम/डीएम 3 की द्रव्यमान सांद्रता के साथ बाँझ रेशम (NaOH या KOH) के घोल की कुछ बूँदें डालें।

लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति निर्धारित करने या उनकी संख्या की गणना करने के लिए, तरल मीडिया में बोने के बजाय, खंड 3.2.1, 3.2.5, 3.2.7 में निर्दिष्ट अगर मीडिया में से किसी एक में गहरी विधि का उपयोग करके बोने की अनुमति है। , 3.2.13 या 3.2.14.

जीनस लैक्टोबैसिलस के एनएचएफ बैक्टीरिया की उपस्थिति या संख्या निर्धारित करने के लिए, सोम में संकेतित तरल मीडिया में से एक पर टीकाकरण किया जाता है। 3.2.6 या 3.2.12.

जीनस लैक्टोबैसिलस के जीवाणुओं की उपस्थिति निर्धारित करने या उनकी संख्या गिनने के लिए, तरल मीडिया में टीका लगाने के बजाय, निम्नलिखित में निर्दिष्ट अन्य मीडिया में से किसी एक में गहरी विधि का उपयोग करके टीका लगाएं। 3.2.7 या 3.2.13.

जीनस ल्यूकोनोस्टोक के बैक्टीरिया की उपस्थिति निर्धारित करने के लिए, i में निर्दिष्ट तरल माध्यम पर टीकाकरण किया जाता है। 3.2.4.

उपस्थिति का निर्धारण करने के लिए, एक तरल माध्यम का उपयोग करने के बजाय, साथ ही पेट्री डिश पर जीनस ल्यूकोनोस्टोक के बैक्टीरिया की संख्या की गणना करने या झिल्ली निस्पंदन विधि का उपयोग करने के लिए, i में निर्दिष्ट अगर माध्यम पर सतह विधि का उपयोग करके टीका लगाएं। 3.2.10.

जीनस स्ट्रेप्टोकोकस के समूह एन के स्ट्रेप्टोकोकी की उपस्थिति या संख्या निर्धारित करने के लिए, खंड 3.2.11 में निर्दिष्ट अगर माध्यम में गहरी विधि का उपयोग करके टीकाकरण किया जाता है। और एस.थर्मोफिलस के लिए वे माध्यम का उपयोग करते हैं। 3.2.16.

पेडियोकोकस जीनस के बैक्टीरिया की उपस्थिति या संख्या निर्धारित करने के लिए, पैराग्राफ 3.2.3 में निर्दिष्ट अगर माध्यम में गहरी विधि का उपयोग करके टीकाकरण किया जाता है।

4.1.4. लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति या संख्या निर्धारित करने के लिए संस्कृतियाँ। जीनस स्ट्रेप्टोकोकस के समूह एन के जीनस लैक्टोबैसिलस स्ट्रेप्टोकोकी के बैक्टीरिया को (30 ± 1) * सी के तापमान पर 5 दिनों से अधिक नहीं या (37 ± 1) * सी के तापमान पर 3 दिनों से अधिक नहीं रखा जाता है; जीनस ल्यूकोनोस्टोक के जीवाणुओं की उपस्थिति निर्धारित करने या उनकी संख्या गिनने के लिए फसलों को (22 ± 1) * सी के तापमान पर 5 दिनों से अधिक नहीं रखा जाता है। एस.थर्मोफिलस की उपस्थिति या संख्या निर्धारित करने के लिए कल्चर को (45±1) *C के तापमान पर (48±3) घंटे ऊष्मायन किया जाता है। जीनस ल्यूकोनोस्टोक के जीवाणुओं की उपस्थिति या गिनती निर्धारित करने के लिए पेट्री डिश पर टीकाकरण नीचे की ओर से किया जाता है।

दृश्य लक्षण दिखाई देने पर तरल मीडिया पर फसलों का ऊष्मायन बंद कर दिया जाता है

अगर मीडिया पर कॉलोनियों की प्रारंभिक गणना 48 घंटों के बाद की जाती है।

4.1.5. अगर मीडिया पर संस्कृतियों में लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति निर्धारित करने या उनकी संख्या की गणना करने के लिए, जीनस लैक्टोबैसिलस के बैक्टीरिया, जीनस स्ट्रेप्टोकोकस के पेडियोकोकस स्ट्रेप्टोकोकी समूह एन। एस.थर्मोफिलस। प्रवेश GOST 30425 के अनुसार या निम्नलिखित में से किसी एक तरीके से प्रतिबंधित है:

पेट्री डिश में जमे हुए पोषक तत्व माध्यम पर, पिघला हुआ और ठंडा किया हुआ दूसरा मिश्रण (45 ± I) *C आगर माध्यम में 5.0 सेमी 1 की मात्रा में डालें और कठोर होने तक छोड़ दें:

पेट्री डिश को 95% एन 2 और 5% सीओ 2 युक्त गैस वातावरण में रखा जाता है:

पेट्री डिश को एनारोस्टेट में रखा जाता है। डिवाइस बंद है, वैक्यूम पंप का उपयोग करके 86.6-93.3 kPa का वैक्यूम बनाया जाता है;

लगभग 2 सेमी ऊंचा स्तंभ प्राप्त करने के लिए आवश्यक मात्रा में तरल माध्यम के साथ प्रत्येक परीक्षण ट्यूब में बाँझ तरल पैराफिन मिलाया जाता है।

4.1.6. तरल मीडिया पर टीकाकरण को प्रतिदिन लेपित किया जाता है और विकास के दृश्यमान संकेतों वाली परीक्षण ट्यूबों का चयन किया जाता है। तरल मीडिया पर वृद्धि की प्रकृति परिशिष्ट 2 में दी गई है। वृद्धि के संकेतों के साथ परीक्षण ट्यूबों से, एग्रीकोन मीडिया पर उपसंस्कृति निम्नानुसार बैक्टीरियोलॉजिकल लूप के साथ की जाती है (पैराग्राफ 4.1.3 देखें)। पृथक कालोनियों के विकास को प्राप्त करने के लिए। फसलें भी उगाई जाती हैं। 4.1.4.

4.1.7. ऊष्मायन के बाद, अगर मीडिया पर टीकाकरण की जांच की जाती है और गिनती के लिए पेट्री डिश का चयन किया जाता है, जिस पर 15 से 150 विशिष्ट कॉलोनियां विकसित हुई हैं।

झिल्ली फिल्टर विधि का उपयोग करके सूक्ष्मजीवों की संख्या निर्धारित करते समय, यदि फिल्टर पर 15 से कम विशिष्ट कॉलोनियां विकसित हुई हैं, तो गिनती के लिए पेट्री डिश का चयन करने की अनुमति दी जाती है।

विशिष्ट उपनिवेशों की विशेषताएँ परिशिष्ट 2 में दी गई हैं।

4.1.8. यह पुष्टि करने के लिए कि विशिष्ट कॉलोनियां लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों या जेनेरा लैक्टोबैसिलस, ल्यूकोनोस्टोक में से एक के बैक्टीरिया से संबंधित हैं। जीनस स्ट्रेप्टोकोकस का पेडियोकोकस स्ट्रेप्टोकोकस समूह एन। एस.थर्मोफिलस, और के अनुसार फसलों से चुना गया। 4.1.7 या 4.1.6 कम से कम 5 विशिष्ट कॉलोनियाँ। प्रत्येक चयनित कॉलोनी का कुछ सूक्ष्मजीवों से संबंध ग्राम स्टेनिंग के संबंध में निर्धारित किया जाता है। गतिशीलता, कैटालेज़ की उपस्थिति, इसके अलावा, जब जीनस ल्यूकोनोस्टोस के बैक्टीरिया की पहचान की जाती है, तो कैप्सूल की उपस्थिति निर्धारित की जाती है, जब स्ट्रेइटोकोकस की पहचान की जाती है

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जीनस स्ट्रेप्टोकोकस के समूह एन के एस.थर्मोफिलस और स्ट्रेप्टोकोकी प्रजातियों में से - पीएच 9.6 के साथ मांस-पेप्टोन शोरबा में और 6.5% NaCI के साथ मांस-पेप्टोन शोरबा में वृद्धि की उपस्थिति।

4.1.8.1. ग्राम स्टेनिंग में सूक्ष्मजीवों का अनुपात निर्धारित करने के लिए, कॉलोनियों से स्मीयर तैयार किए जाते हैं, जिन्हें GOST 30425 के अनुसार स्टेन किया जाता है और सूक्ष्मदर्शी रूप से जांच की जाती है।

4.1.8.2. कालोनियों से सूक्ष्मजीवों की गतिशीलता का अध्ययन करने के लिए, हैंगिंग या क्रश्ड ड्रॉप विधि का उपयोग करके तैयारी तैयार की जाती है और सूक्ष्मदर्शी से जांच की जाती है। माइक्रोस्कोपी के परिणामों का मूल्यांकन परिशिष्ट I के अनुसार किया जाता है।

4.1.8.3. फसलों की कैटालेज़ गतिविधि GOST 30425 के अनुसार निर्धारित की जाती है।

कैटालेज़ गतिविधि के निर्धारण के परिणामों का मूल्यांकन परिशिष्ट 1 के अनुसार किया जाता है।

जीनस के बैक्टीरिया में हाइड्रोजन पेरोक्साइड का खतरा;! पेडियोकोकस एंजाइम स्यूडोकैटलेज़ के कारण संभव है। इसलिए, लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों या जीनस पेडियोकोकस के बैक्टीरिया का निर्धारण करते समय, यदि ग्राम-पॉजिटिव, गैर-गतिशील सूक्ष्मजीव विशिष्ट कॉलोनियों में पाए जाते हैं। जिनके पास सकारात्मक कैटालेज़ प्रतिक्रिया है, वे बेंज़िडाइन परीक्षण करके साइटोक्रोम की अनुपस्थिति की निगरानी करते हैं। फिर, पेट्री डिश पर उगे 24-48 घंटे पुराने बैक्टीरिया की कॉलोनियों को बेंज़िडाइन घोल से भर दिया जाता है। खंड 3.1.9 में निर्दिष्ट। घोल से कालोनियों को संतृप्त करने के बाद, कप में लगभग समान मात्रा में 5% हाइड्रोजन पेरोक्साइड मिलाया जाता है। जीनस पेडियोकोकस के बैक्टीरिया सहित लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों में साइटोक्रोम नहीं होते हैं। जब साइटोक्रोम मौजूद होते हैं, तो कॉलोनियां नीली-हरी या चमकीली नीली दिखाई देती हैं।

बेंज़िडाइन की अनुपस्थिति में, 0.05% की कम ग्लूकोज सांद्रता के साथ खंड 3.2.15 के माध्यम पर एनएसईपीडोक गैलेज़ की उपस्थिति निर्धारित करने की अनुमति है।

खंड 4.1.4 के अनुसार फसलें उगाई जाती हैं। GOST 30425 के अनुसार स्यूडोकैटलेज़ का निर्धारण कैटालेज़ की तरह ही किया जाता है।

स्यूडोकैटलेज़ उत्पन्न करने वाली संस्कृतियाँ पेडिओकोकस जीनस से संबंधित हैं।

4.1.8.4. ल्यूकोनोस्टोक जीनस के बैक्टीरिया की पहचान करते समय, बैक्टीरिया कैप्सूल की पहचान करने के लिए तैयारी तैयार की जाती है और बुरी के साथ दाग दिया जाता है। ऐसा करने के लिए, एक अच्छी तरह से डीग्रीज़ किए गए और पके हुए ग्लास स्लाइड पर बैक्टीरिया कल्चर की एक बूंद को बारीक काली स्याही पाउडर या निग्रोसिन सस्पेंशन के साथ मिलाएं।

पॉलिश किए हुए किनारों वाले दूसरे ग्लास का उपयोग करके, एक पतला स्मीयर जल्दी से तैयार किया जाता है, जिसे बर्नर की लौ से कई बार गुजारकर ठीक किया जाता है। स्मीयर को क्रिस्टल वायलेट के घोल या कार्बोल्फुचिन के कार्यशील घोल से रंगा जाता है। पानी के साथ एक बर्तन में सावधानी से धोएं, सूखने के लिए हवा में छोड़ दें और माइक्रोस्कोप के नीचे जांच करें। फिल्टर पेपर की शीटों के बीच स्मीयर को न सुखाएं। तैयारी की पृष्ठभूमि को काली स्याही या टायरोसिन के पतले निलंबन से चित्रित किया गया है। जीवाणु शरीर एकवर्णी रूप से रंजित होते हैं। कैप्सूल बिना रंग के रह जाते हैं।

4.1.8.5. समूह एन स्ट्रेप्टोकोकी की पहचान करते समय;! स्ट्रेप्टोकोकस, एस थेनोफिलस प्रजाति के स्ट्रेप्टोकोकी 9.6 के पीएच के साथ मांस-पेप्टोन शोरबा में और 6.5% की सोडियम क्लोराइड सामग्री के साथ मांस-पेप्टोन शोरबा में वृद्धि की कमी का निर्धारण करते हैं।

आज के हिसाब से इस संस्कृति के लिए. 4.1.8 को सोमवार में निर्दिष्ट मीडिया पर पुनः प्रसारित किया गया। 3.2.8 और 3.2.9.

फसलों को 3 दिनों के लिए (30±1)°C के तापमान पर ऊष्मायन किया जाता है। और एस. थेनोफिलस की पहचान करते समय, फसलों को 3 दिनों के लिए (45 ± 1) 'C पर ऊष्मायन किया जाता है।

4.2. किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर कल्चर, जीवाणु सांद्रण और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी का परीक्षण करना

4.2.1. GOST 9225 के अनुसार किण्वित गर्भाशय उत्पादों (सूखा और तरल) के तनुकरण की तैयारी।

दूध में स्टार्टर कल्चर, जीवाणु सांद्रण और जीवाणु संबंधी तैयारियों का मिश्रण तैयार करने के लिए! बैक्टीरिया की परत, बोतल और बैग के किनारों को शराब से पोंछ दिया जाता है, बोतल के किनारे को जला दिया जाता है और स्टॉपर हटा दिया जाता है, बैग के किनारे को तेज कैंची से काट दिया जाता है, परीक्षण सामग्री का 1 ग्राम वजन किया जाता है एक बाँझ या ज्वलनशील मोर्टार, जिसे पेट्री डिश के ढक्कन या बाँझ कागज से ढक दिया जाता है, अच्छी तरह से रगड़ा जाता है, 99 सेमी" घोल वाले फ्लास्क से थोड़ी मात्रा में क्लोराइड घोल सोडियम या फॉस्फेट बफर मिलाया जाता है; या बफर। निलंबित सामग्री को इसमें डाला जाता है शेष सोडियम क्लोराइड या फॉस्फेट बफर समाधान के साथ फ्लास्क और I: 100 का दूसरा तनुकरण प्राप्त किया जाता है।

और किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर कल्चर, बैक्टीरियल सांद्रण और मदर एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु संबंधी तैयारियों के दूसरे तनुकरण के लिए, तालिका के अनुसार नियामक और तकनीकी दस्तावेज में निर्दिष्ट मदर एसिड बैक्टीरिया की मात्रा के अनुसार निम्नलिखित तनुकरण तैयार किए जाते हैं। मैं।

4.2.2. लैक्टिक एसिड स्ट्रेप्टोकोकी की संख्या की गणना करने के लिए टीकाकरण निम्नलिखित के अनुसार तैयार किए गए एक उचित या तरल पोषक माध्यम में किया जाता है। 3.3.2 और 3.3.3. और लैक्टिक एसिड कणों की संख्या की गणना करने के लिए बुवाई - खंड 3.3.3 के अनुसार तैयार तरल माध्यम में।

अगर पोषक तत्व माध्यम में बुवाई के लिए, तनुकरण का चयन किया जाता है, जब बोया जाता है, तो प्लेटों पर 15 से 150 कॉलोनियां बढ़ती हैं।

प्रत्येक नमूने को GOST 9225 के अनुसार पेट्री डिश पर उत्पाद के संबंधित तनुकरण के 1 सेमी 3 (तालिका 1 देखें) के साथ टीका लगाया जाता है।

पिछले तीन से चार तनुकरणों (तालिका I देखें) से तरल पोषक माध्यम में बुआई करते समय, प्रत्येक तनुकरण का 1 सेमी बाँझ मलाई रहित दूध के साथ दो समानांतर परीक्षण ट्यूबों में डालें।

4.2.3. संस्कृतियों के साथ टेस्ट ट्यूब या पेट्री डिश को थर्मोस्टेट में रखा जाता है और मेसोफिलिक लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की गिनती के लिए (30±1) *С के तापमान पर, थर्मोफिलिक लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की गिनती के लिए (40±1) *С के तापमान पर इनक्यूबेट किया जाता है और मेसोफिलिक और थर्मोफिलिक लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की संयुक्त गणना के लिए (32±1) *С पर। फसलों को 72 घंटों तक ऊष्मायन किया जाता है।

5. प्रसंस्करण परिणाम

5.1. खाद्य उत्पाद विश्लेषण परिणामों का प्रसंस्करण (किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर संस्कृतियों, जीवाणु सांद्रता, लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी को छोड़कर)

5.1.1. खाद्य उत्पाद विश्लेषण के परिणामों का प्रत्येक नमूने के लिए अलग से मूल्यांकन किया जाता है।

5.1.2. यदि, निर्धारित करते समय सांस्कृतिक, रूपात्मक और जैव रासायनिक गुणों का अध्ययन करते समय:

लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीव ग्राम-पॉजिटिव पाए गए। गैर-गतिशील, कैटालेज़-नकारात्मक या गैर-बीजाणु-गठन वाली छड़ें। ग्राम पॉजिटिव। गैर-गतिशील, कैटालेज़-नकारात्मक या छद्म-कैगल एज़ू कोक्सी बनाने वाले, निष्कर्ष में जोड़ें। पता चला कि सूक्ष्मजीव लैक्टिक एसिड हैं;

जीनस लैक्टोबैसिलस के बैक्टीरिया गैर-बीजाणु-निर्माण, ग्राम-पॉजिटिव, गैर-गतिशील पाए गए। कैटालेज़-नकारात्मक छड़ें, फिर एक निष्कर्ष दें कि। पता चला कि सूक्ष्मजीव लैक्टोबैसिलस जीनस से संबंधित हैं;

जीनस ल्यूकोनोस्टोक के बैक्टीरिया गैर-बीजाणु-निर्माण और ग्राम-पॉजिटिव पाए गए। गतिहीन, कैटालेज़-नकारात्मक, एक कोक्सी कैप्सूल से घिरा हुआ, फिर वे एक निष्कर्ष देते हैं। पता चला कि पाए गए सूक्ष्मजीव जीनस ल्यूकोनोस्टोक से संबंधित हैं:

जीनस स्ट्रेप्टोकोकस समूह एन के गैर-स्पोरुलेटिंग बैक्टीरिया पाए गए। ग्राम पॉजिटिव। गैर-गतिशील, कैटालेज़-नकारात्मक, पीएच 9.6 और 6.5% NaCI के साथ पोषक तत्व मीडिया में नहीं बढ़ रहा है। कोक्की, फिर वे उसके बारे में निष्कर्ष देते हैं। पता चला कि सूक्ष्मजीव जीनस स्ट्रेप्टोकोकस समूह एन से संबंधित हैं;

पेडियोकोकस जीनस के बैक्टीरिया गैर-बीजाणु-निर्माण और ग्राम-पॉजिटिव पाए गए। नॉनमोटाइल, कैटालेज़-नेगेटिव (या कैटालेज़-पॉज़िटिव, लेकिन एक नकारात्मक बेंज़िडाइन परीक्षण दे रहा है) या स्यूडोकैटलेज़-पॉज़िटिव कोक्सी, उसके बारे में एक निष्कर्ष दें। पता चला कि सूक्ष्मजीव जीनस पेडियोकोकस से संबंधित हैं;

एस.थर्मोफिलस प्रजाति के बैक्टीरिया गैर-बीजाणु बनाने वाले पाए गए। पंप सकारात्मक. गतिहीन. रोल्ड एज़ोट्रिक्स। लेर्मोफिलिक कोक्सी, जो pH 9.6 और 6.5% NaCl वाले पोषक माध्यम में नहीं उगते। वे उसके बारे में निष्कर्ष देते हैं। पता चला कि पाए गए सूक्ष्मजीव स्ट्रेप्टोकोकस थेमियोफिलस प्रजाति के हैं।

5.1.3. यदि 80% मामलों में विशिष्ट कालोनियों की पुष्टि हो जाती है, यानी 5 में से कम से कम 4 कालोनियों में, सूक्ष्मजीवों के कुछ समूहों या जेनेरा की वृद्धि की पुष्टि हो जाती है, तो यह माना जाता है कि डिश पर उगने वाली सभी विशिष्ट कालोनियां इसी से संबंधित हैं। समूह, वंश या प्रजाति। अन्य मामलों में, पुष्टि के लिए ली गई विशिष्ट कॉलोनियों की कुल संख्या में पुष्टि की गई कॉलोनियों के प्रतिशत के आधार पर सूक्ष्मजीवों की संख्या निर्धारित की जाती है।

5.1.4. एनएफपी का निर्धारण करते समय या किसी उत्पाद को तरल मीडिया पर टीका लगाते समय, टेस्ट ट्यूब को सकारात्मक माना जाता है यदि, अगर मीडिया पर बाद के उपसंस्कृति और विशेषता कॉलोनियों की पुष्टि पर, परिभाषित समूहों, जेनेरा या प्रजातियों के सूक्ष्मजीव कम से कम एक विशेषता कॉलोनी में पाए जाते हैं।

5.1.5. GOST 30425 के अनुसार सूक्ष्मजीवों की सबसे संभावित संख्या (MPN) सकारात्मक ट्यूबों की संख्या से निर्धारित होती है।

यदि टीकाकरण के लिए चुने गए दस गुना तनुकरण अधिक थे, उदाहरण के लिए 10 -5। 10" 4 और 10"\ तो एनएचएफ का तालिका मान चयनित और सारणीबद्ध दस गुना तनुकरण के बीच के अंतर से गुणा किया जाता है, अर्थात 100 से।

यदि टीकाकरण के लिए चुने गए दस गुना तनुकरण कम थे, उदाहरण के लिए 10° (1 ग्राम)। 10""। 10~2, फिर एनएचएफ का सारणीबद्ध मान चयनित और सारणीबद्ध दस गुना तनुकरणों के बीच के अंतर से विभाजित किया जाता है, अर्थात 10 से।

5.1.6. पेट्री डिश में या एन एचएफ विधि द्वारा या झिल्ली निस्पंदन विधि का उपयोग करके सूक्ष्मजीवों की संख्या निर्धारित करने के परिणामों को प्रति 1 ग्राम या 1 सेमी उत्पाद में पुनर्गणना किया जाता है और GOST 26670 की आवश्यकताओं के अनुसार दर्ज किया जाता है।

5.1.7. उत्पाद के एक निश्चित नमूने में सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति का निर्धारण करने के परिणाम निम्नानुसार व्यक्त किए जाते हैं: उत्पाद के नमूने में लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीव (यदि आवश्यक हो, जीनस या प्रजाति का संकेत दिया गया है) का पता लगाया जाता है या नहीं पाया जाता है।

5.2. किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर संस्कृतियों, जीवाणु सांद्रता और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी के विश्लेषण के परिणामों को संसाधित करना।

5.2.1. जब लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया एक तरल माध्यम-दूध-में विकसित होते हैं तो दूध जम जाता है।

लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया (स्ट्रेप्टोकोक्की और बेसिली) की कुल संख्या की गणना करने के लिए, अंतिम तीन तनुकरण जिनमें दूध फटा है, को नोट किया जाता है।

एक संख्यात्मक विशेषता बनाओ. इसमें तीन संख्याएँ होती हैं जो पिछले तीन तनुकरणों में फटे हुए दूध के साथ टेस्ट ट्यूबों की संख्या दर्शाती हैं। संख्यात्मक विशेषता का पहला अंक उस तनुकरण से मेल खाता है जिस पर दूध दो परखनलियों में जम गया। निम्नलिखित संख्याएँ बाद के दो तनुकरणों में फटे हुए दूध के साथ टेस्ट ट्यूबों की संख्या दर्शाती हैं।

तालिका के अनुसार संख्यात्मक विशेषताओं के अनुसार। 2 लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों की सबसे संभावित संख्या ज्ञात करें। जिसे उस तनुकरण से गुणा किया जाता है जिससे संख्यात्मक विशेषता का पहला अंक शुरू होता है।

अस्वीकार्य संयोजन तालिका में शामिल नहीं हैं.

परिणामी संख्या 1 ग्राम या 1 सेमी' उत्पाद में लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया कोशिकाओं की संख्या से मेल खाती है।

आधिकारिक प्रकाशन पुनरुत्पादन निषिद्ध है

© स्टैंडर्ड्स पब्लिशिंग हाउस। 1989 © मानक सूचना. 2010

1 जुलाई 2002 को, GOST 24104 - 2001 रूसी संघ के क्षेत्र में लागू हुआ।

रूसी संघ के क्षेत्र में संचालित होता है

4.1.5, 4.1.8.1, 4.1.8.3, 5.1.5, परिशिष्ट 1

5. अंतरराज्यीय मानकीकरण, मेट्रोलॉजी और प्रमाणन परिषद (आईयूएस 11-12-94) के प्रोटोकॉल एन 5-94 के अनुसार वैधता अवधि हटा दी गई थी।

6. पुनर्प्रकाशन. अप्रैल 2010


यह मानक भोजन और किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर संस्कृतियों, जीवाणु सांद्रता और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी पर लागू होता है और व्यवहार्य लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों और उनकी सबसे संभावित संख्या (एमपीएन) निर्धारित करने के लिए एक विधि स्थापित करता है, साथ ही खाद्य उत्पादों में निर्धारण के तरीके भी स्थापित करता है। (किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर कल्चर, बैक्टीरियल सांद्रण और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी को छोड़कर) जेनेरा लैक्टोबैसिलस, ल्यूकोनोस्टोक, जीनस स्ट्रेप्टोकोकस, पेडियोकोकस, एस थर्मोफिलस के समूह एन स्ट्रेप्टोकोकी के बैक्टीरिया और सबसे संभावित संख्या (एमपीएन) का निर्धारण ) जीनस लैक्टोबैसिलस के बैक्टीरिया का।

यह विधि उत्पाद की एक निश्चित मात्रा को बोने और (या) इसे तरल या अगर चयनात्मक पोषक मीडिया में पतला करने, इष्टतम परिस्थितियों में फसलों की खेती करने और यदि आवश्यक हो, तो पाए गए सूक्ष्मजीवों के रूपात्मक और जैव रासायनिक गुणों का निर्धारण करने और उनकी गिनती करने पर आधारित है। .

यह विधि इसके लिए अभिप्रेत है:

विनियामक और तकनीकी दस्तावेज़ीकरण की आवश्यकताओं के साथ भोजन और किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर संस्कृतियों, जीवाणु सांद्रता और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी के सूक्ष्मजीवविज्ञानी गुणवत्ता संकेतकों का अनुपालन स्थापित करना;

डिब्बाबंद भोजन की औद्योगिक बाँझपन स्थापित करना;

खाद्य दोषों के कारणों की पहचान करना।

1. नमूना चयन और तैयारी

1. नमूना चयन और तैयारी

1.1. किण्वित दूध को छोड़कर, खाद्य उत्पादों के नमूनों का चयन और तैयारी गोस्ट 26668 , गोस्ट 26669.

किण्वित दूध उत्पादों (सूखा और तरल), स्टार्टर कल्चर, जीवाणु सांद्रण और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी का नमूना लेना और उन्हें विश्लेषण के लिए तैयार करना - के अनुसार गोस्ट 9225*.
________________
गोस्ट आर 53430-2009.

1.2. डिब्बाबंद भोजन की लीक के लिए जाँच की जाती है - के अनुसार गोस्ट 8756.18.

पूर्ण डिब्बाबंद भोजन, दिखने में सामान्य, 1 डीएम तक की क्षमता वाले कंटेनरों में कम से कम 5 दिनों के लिए परीक्षण से पहले 30-37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टेट किया जाता है, 1 डीएम से अधिक की क्षमता वाले कंटेनरों में - कम से कम 7 दिनों के लिए। .

खाद्य उत्पाद जिनमें लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों की संख्या मानकीकृत है, थर्मोस्टेटिंग के अधीन नहीं हैं।

उत्पाद का पतलापन पेप्टोन-सलाइन घोल के अनुसार तैयार किया जाता है गोस्ट 26669.

5% से अधिक NaCl के द्रव्यमान अंश वाले उत्पादों का प्रारंभिक तनुकरण पेप्टोन पानी का उपयोग करके तैयार किया जाता है; मछली और मांस उत्पादों का प्रारंभिक पतलापन खारे घोल का उपयोग करके तैयार किया जाता है।

2. उपकरण, सामग्री और अभिकर्मक

परीक्षण करने के लिए उपकरण, सामग्री और अभिकर्मकों का उपयोग किया जाता है गोस्ट 10444.1 , गोस्ट 9225और नीचे:

गोस्ट 24104*, 200 ग्राम तक की अधिकतम वजन सीमा और ±2 मिलीग्राम (अभिकर्मकों के वजन के लिए) की अनुमेय त्रुटि सीमा के साथ;
________________
गोस्ट 24104-2001 गोस्ट आर 53228-2008.


मेट्रोलॉजिकल विशेषताओं के साथ सामान्य प्रयोजन प्रयोगशाला स्केल गोस्ट 24104*, 200 ग्राम तक की सबसे बड़ी वजन सीमा और ±15 मिलीग्राम (उत्पाद के वजन के लिए) की अनुमेय त्रुटि सीमा के साथ;
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* 1 जुलाई 2002 से प्रभावी गोस्ट 24104-2001. रूसी संघ के क्षेत्र में संचालित होता है गोस्ट आर 53228-2008.


चरण-विपरीत माइक्रोस्कोपी या अन्य समान ब्रांडों के लिए एक उपकरण के साथ प्रकाश जैविक माइक्रोस्कोप;

कवरस्लिप्स गोस्ट 6672 ;

कांच की स्लाइड गोस्ट 9284 ;

28-55 डिग्री सेल्सियस के ऑपरेटिंग तापमान रेंज वाला थर्मोस्टेट, जो आपको ±1 डिग्री सेल्सियस की त्रुटि के साथ निर्धारित तापमान बनाए रखने की अनुमति देता है;

कॉर्क प्लग गोस्ट 5541 ;

फोल्डिंग पॉकेट आवर्धक कांच, 4-10 गुना आवर्धन प्रदान करता है गोस्ट 25706 ;

बैक्टीरियल और वायरोलॉजिकल दवाओं के लिए पैनक्रिएटिन;

तकनीकी क्लोरोफॉर्म गोस्ट 20015 ;

19°T से अधिक अम्लता वाला स्किम्ड दूध, गाय के दूध से प्राप्त, GOST 13264* के अनुसार कम से कम 2 ग्रेड तैयार किया गया, या स्किम्ड मिल्क पाउडर के अनुसार गोस्ट 10970 **;
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* रूसी संघ के क्षेत्र पर मान्य गोस्ट आर 52054-2003.
** रूसी संघ के क्षेत्र पर मान्य गोस्ट आर 52791-2007.


एल-आर्जिनिन हाइड्रोक्लोराइड;

बेंजिडाइन बेसिक या हाइड्रोक्लोरिक एसिड;

पोटेशियम साइट्रेट;

कार्बोक्सिलमिथाइलसेलुलोज;

जुड़वां-80;

नाजिया;

अमोनियम साइट्रेट;

मैग्नीशियम सल्फेट (MgSO·7HO);

मैंगनीज सल्फेट (MnSO · 2HO);

मैंगनीज सल्फेट (MnSO · 4HO);

सौरबिक तेजाब;

निग्रोसिन;

फिनोल.

3. परीक्षण के लिए तैयारी

3.1. खाद्य उत्पादों के परीक्षण के लिए अभिकर्मकों और संकेतकों के समाधान की तैयारी (किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर संस्कृतियों, जीवाणु सांद्रता और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी को छोड़कर)

3.1.1. ब्रोमोक्रेसोल पर्पल संकेतक, 1 ग्राम/डीएम की द्रव्यमान सांद्रता वाला घोल: 0.1 ग्राम ब्रोमोक्रेसोल पर्पल को, सड़न रोकनेवाला के नियमों के अनुपालन में, स्थानांतरित किया जाता है, बाँझ आसुत जल से धोया जाता है, 100 सेमी3 की क्षमता वाले एक मापने वाले कंटेनर में, और मात्रा को उसी पानी से निशान के अनुसार समायोजित किया जाता है। समाधान को कमरे के तापमान पर 3 महीने से अधिक समय तक संग्रहीत नहीं किया जाता है।

3.1.2. कैल्शियम कार्बोनेट, 30 ग्राम/डीएम की द्रव्यमान सांद्रता वाला जलीय निलंबन: 3 ग्राम कैल्शियम कार्बोनेट, निष्फल गोस्ट 10444.1, स्थानांतरित करें, आसुत जल से धोकर, 100 सेमी3 मापने वाले कप में डालें, मात्रा को निशान के अनुसार समायोजित करें। सस्पेंशन को 20 मिनट के लिए (121±1)°C के तापमान पर निष्फल किया जाता है। सस्पेंशन को कमरे के तापमान पर 3 महीने से अधिक समय तक संग्रहीत नहीं किया जाता है।

3.1.3. कार्बोल्फुचिन, संकेंद्रित घोल: 1 ग्राम फुकसिन को 10 मिली 96% एथिल अल्कोहल और 100 मिली फिनोल घोल के साथ 50 ग्राम/डीएम की द्रव्यमान सांद्रता के साथ मिलाया जाता है।

कार्बोल्फुचिन का कार्यशील घोल तैयार करने के लिए, कार्बोल्फुचिन के 10 सेमी सांद्रित घोल में 90 सेमी आसुत जल मिलाएं।

3.1.4. 10 ग्राम/डीएम की द्रव्यमान सांद्रता के साथ क्रिस्टल वायलेट समाधान: 1 ग्राम क्रिस्टल वायलेट को स्थानांतरित किया जाता है, आसुत जल से धोया जाता है, 100 सेमी3 मापने वाले कप में, मात्रा को निशान के अनुसार समायोजित किया जाता है। समाधान को कमरे के तापमान पर 3 महीने से अधिक समय तक संग्रहीत नहीं किया जाता है।

3.1.5. 100 ग्राम/डीएम की द्रव्यमान सांद्रता के साथ निग्रोसिन निलंबन: 10 ग्राम निग्रोसिन को स्थानांतरित किया जाता है, आसुत जल से धोया जाता है, 100 सेमी3 मापने वाले कप में, मात्रा को निशान के अनुसार समायोजित किया जाता है, 45-50 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर गरम किया जाता है। एक पानी का स्नान, फिर एक कपास-धुंध फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया गया।

3.1.6. पेप्टोन-सलाइन घोल के अनुसार तैयार किया जाता है गोस्ट 26669.

3.1.7. के अनुसार पेप्टोन पानी तैयार किया जाता है गोस्ट 26669.

3.1.8. सॉर्बिक एसिड, क्षारीय घोल: 1 ग्राम सॉर्बिक एसिड को स्थानांतरित किया जाता है, सोडियम हाइड्रॉक्साइड NaOH = 1 mol/dm के घोल से धोया जाता है, 100 सेमी3 मापने वाले कप में, मात्रा को उसी घोल के साथ निशान पर समायोजित किया जाता है। परिणामी घोल को झिल्ली निस्पंदन के अनुसार निष्फल किया जाता है गोस्ट 26670.

इसे अपूतिता के नियमों के अनुपालन में निस्पंदन के बिना सॉर्बिक एसिड का घोल तैयार करने की अनुमति है, जबकि सोडियम हाइड्रॉक्साइड घोल बाँझ आसुत जल में तैयार किया जाता है।

3.1.9. साइटोक्रोम के निर्धारण के लिए अभिकर्मक: 1 ग्राम बेंज़िडाइन बेसिक या हाइड्रोक्लोरिक एसिड को 20 सेमी 99.8% ग्लेशियल एसिटिक एसिड में घोला जाता है, 30 सेमी आसुत जल मिलाया जाता है और धीरे-धीरे गर्म किया जाता है, ठंडा होने के बाद, 50 सेमी 96% एथिल अल्कोहल मिलाया जाता है। समाधान के लिए. घोल को 1 महीने के लिए रेफ्रिजरेटर में संग्रहित किया जाता है।

3.1.10. के अनुसार नमकीन घोल तैयार किया जाता है गोस्ट 10444.1.

3.2. खाद्य उत्पादों के परीक्षण के लिए पोषक तत्व मीडिया की तैयारी (किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर संस्कृतियों, जीवाणु सांद्रता और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी को छोड़कर)

3.2.1. ब्लिकफेल्ट सघन माध्यम के अनुसार तैयार किया जाता है गोस्ट 10444.1.

3.2.2. ब्लिकफेल्ट का माध्यम तरल है: 10 ग्राम लैक्टोज, 10 ग्राम ग्लूकोज, 5 ग्राम पेप्टोन को 950 सेमी आसुत जल में घोला जाता है, उबाला जाता है और एक पेपर फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है। फ़िल्टर में क्लॉज 3.1.1 के अनुसार 20 सेमी यीस्ट अर्क और 32 सेमी ब्रोमोक्रेसोल पर्पल घोल मिलाएं, पीएच को 7.3 ± 0.1 पर सेट करें, बाँझ टेस्ट ट्यूब में डालें और (117 ± 1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर स्टरलाइज़ करें। 20 मिनट।

3.2.3. बुधवार ब्रिग्स, शार्प द्वारा संशोधित:

875 सेमी आसुत जल में 15 ग्राम पेप्टोन, 20 ग्राम ग्लूकोज, 25 सेमी खमीर अर्क, 5 ग्राम सोडियम एसीटेट, 5 ग्राम पोटेशियम फॉस्फेट मोनोसबस्टिट्यूटेड, 2 ग्राम अमोनियम साइट्रेट, 100 सेमी टमाटर का रस मिलाएं (मान लें कि रस में 4.5% से कम घुलनशील ठोस पदार्थ होते हैं, यदि टमाटर के रस में अलग मात्रा में शुष्क पदार्थ होते हैं, तो 4.5% की शुष्क पदार्थ सामग्री पर पुनर्गणना करें), 1 सेमी ट्वीन-80, 5 सेमी नमक घोल (MgSO 7HO - 11.5 ग्राम, MnSO·4HO - 2.86 ग्राम, FeSO·7HO - 0.68 ग्राम, आसुत जल 100 सेमी तक), 15 ग्राम अगर।

मिश्रण को धीमी आंच पर तब तक उबाला जाता है जब तक कि आगर पूरी तरह से घुल न जाए। पीएच सेट करें ताकि स्टरलाइज़ेशन के बाद यह 25 डिग्री सेल्सियस (6.5 ± 0.1) पर रहे। माध्यम को 15 मिनट के लिए (115±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर रोगाणुरहित किया जाता है।

3.2.4. यीस्ट मीडियम: 100 सेमी यीस्ट अर्क के अनुसार तैयार किया जाता है गोस्ट 10444.1, 900 मिलीलीटर आसुत जल, 10 ग्राम निष्फल पानी मिलाएं गोस्ट 10444.1कैल्शियम कार्बोनेट और 100 ग्राम सुक्रोज। सुक्रोज के घुलने तक मिश्रण को गर्म किया जाता है, पीएच को समायोजित किया जाता है ताकि स्टरलाइज़ेशन के बाद यह 25 डिग्री सेल्सियस (7.1 ± 0.1) पर हो, 10 सेमी टेस्ट ट्यूब में डाला जाए और 15 के लिए (121 ± 1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर स्टरलाइज़ किया जाए। मि.

3.2.5. पत्तागोभी अगर मीडियम के अनुसार तैयार की जाती है गोस्ट 10444.1.

3.2.6. तरल एमआरएस माध्यम: 10 ग्राम पेप्टोन, 20 सेमी खमीर अर्क, 20.0 ग्राम ग्लूकोज, 1.0 सेमी ट्वीन-80, 2.0 ग्राम पोटेशियम फॉस्फेट, 5.0 ग्राम सोडियम एसीटेट को 1.0 डीएम3 वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में रखा जाता है ट्रायमोनियम साइट्रेट, 0.2 ग्राम मैग्नीशियम सल्फेट, 0.05 ग्राम मैंगनीज सल्फेट (MnSO 4HO), निशान पर मांस का पानी मिलाएं; पानी के स्नान में गर्म करके घटकों को घोलें और पीएच सेट करें ताकि नसबंदी के बाद यह 25 डिग्री सेल्सियस (6.2 ± 0.1) पर हो। माध्यम को 10 सेमी की बाँझ परीक्षण ट्यूबों में डाला जाता है और 15 मिनट के लिए (121±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है। पोषक माध्यम वाले टेस्ट ट्यूबों को 30 दिनों से अधिक समय तक (4±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर संग्रहित किया जाता है।

3.2.7. एमआरएस अगर माध्यम पैराग्राफ 3.2.6 में निर्दिष्ट नुस्खा के अनुसार 15-18 ग्राम अगर मिलाकर तैयार किया जाता है। घटकों को घोलने के बाद, माध्यम को बाँझ फ्लास्क में डाला जाता है और 15 मिनट के लिए (121±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है। तैयार माध्यम को (4±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 30 दिनों से अधिक समय तक संग्रहीत नहीं किया जाता है।

यदि आवश्यक हो, चयनात्मकता बढ़ाने के लिए, नसबंदी के बाद, क्लॉज 3.1.8 के अनुसार 1 सेमी क्षारीय सॉर्बिक एसिड घोल से 1 डीएम अगर या तरल माध्यम मिलाएं।

3.2.8. पीएच 9.6 के साथ मध्यम मांस-पेप्टोन शोरबा:

मांस-पेप्टोन शोरबा के अनुसार तैयार किया गया गोस्ट 10444.1, के अनुसार क्षार और अम्ल समाधान का उपयोग करके पीएच को समायोजित करें गोस्ट 10444.1ताकि स्टरलाइजेशन के बाद 25 डिग्री सेल्सियस पर यह 9.6 हो जाए। माध्यम को 20 मिनट के लिए (121±1)°C के तापमान पर रोगाणुरहित किया जाता है।

3.2.9. 6.5% सोडियम क्लोराइड युक्त मध्यम मांस-पेप्टोन शोरबा के अनुसार तैयार किया जाता है गोस्ट 10444.1, लेकिन तैयारी के दौरान, माध्यम के प्रति 1 डीएम में अतिरिक्त सोडियम क्लोराइड की मात्रा 65 ग्राम तक बढ़ा दें।

3.2.10. सुक्रोज के साथ पोषक तत्व अगर माध्यम:

1 डीएम मांस-पेप्टोन शोरबा में 100.0 ग्राम सुक्रोज, 15.0 ग्राम अगर मिलाया जाता है, कभी-कभी हिलाते हुए, मिश्रण को उबालने के लिए गर्म किया जाता है और सभी घटक पूरी तरह से घुल जाते हैं।

माध्यम को 45-55 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा किया जाता है और पीएच को समायोजित किया जाता है ताकि नसबंदी के बाद यह 25 डिग्री सेल्सियस (7.1 ± 0.1) पर हो।

माध्यम को फ्लास्क में डाला जाता है और (121±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 15 मिनट के लिए निष्फल किया जाता है। स्टरलाइज़ेशन और पीएच की जांच के बाद, माध्यम को अच्छी तरह से मिलाया जाता है और पेट्री डिश में डाला जाता है, 14 दिनों से अधिक के लिए (4±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर संग्रहीत किया जाता है।

3.2.11. रेड्डी का माध्यम: मध्यम आधार - 500 सेमी आसुत जल वाले फ्लास्क में 15.0 ग्राम अगर डालें और पानी के स्नान में तब तक गर्म करें जब तक कि आगर घुल न जाए। 500 मिलीलीटर आसुत जल वाले एक अन्य फ्लास्क में, 10.0 ग्राम पोटेशियम साइट्रेट और 15.0 ग्राम कार्बोक्सिलमिथाइलसेलुलोज डालें और गर्म करके घोलें। दोनों फ्लास्क की सामग्री को मिलाया जाता है और 3.0 ग्राम पेप्टोन, 25 सेमी खमीर अर्क, 1.25 ग्राम पोटेशियम फॉस्फेट, 5.0 ग्राम एल-आर्जिनिन हाइड्रोक्लोराइड मिलाया जाता है, पानी के स्नान में गर्म किया जाता है जब तक कि घटक पूरी तरह से घुल न जाएं, ठंडा किया जाए। 45-55 डिग्री सेल्सियस का तापमान और पीएच सेट करें ताकि नसबंदी के बाद यह 25 डिग्री सेल्सियस (6.3 ± 0.2) पर रहे। मीडियम बेस को (121±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 15 मिनट के लिए निष्फल किया जाता है और (4±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 30 दिनों से अधिक समय तक संग्रहीत नहीं किया जाता है।

पोषक तत्व माध्यम तैयार करने के लिए, 5.0 सेमी बाँझ स्किम दूध, 30 ग्राम/डीएम की द्रव्यमान सांद्रता के साथ कैल्शियम कार्बोनेट के 100 सेमी निलंबन और 1 ग्राम/डीएम की द्रव्यमान सांद्रता के साथ ब्रोमोक्रेसोल पर्पल के 2 सेमी घोल को मिलाएं। 1 डीएम को पिघलाकर 45-55 डिग्री सेल्सियस बेस तक ठंडा किया गया।

3.2.12. तरल रोगोसा माध्यम: 10.0 ग्राम पेप्टोन, 25.0 सेमी यीस्ट अर्क, 20.0 ग्राम ग्लूकोज, 1.0 सेमी ट्वीन-80, 6.0 ग्राम पोटेशियम फॉस्फेट मोनो को 1.0 डीएम3 की क्षमता वाले वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में रखें, 2. 0 ग्राम अमोनियम साइट्रेट, 25.0 ग्राम सोडियम एसीटेट, 1.32 सेमी ग्लेशियल एसिटिक एसिड, 0.575 ग्राम मैग्नीशियम सल्फेट, 0.12 ग्राम मैंगनीज सल्फेट (एमएनएसओ 2एचओ), 0.034 ग्राम फेरस सल्फेट, आसुत जल को निशान में जोड़ें, पानी के स्नान में गर्म करने वाले घटकों को भंग करें और समायोजित करें pH ताकि स्टरलाइज़ेशन के बाद यह 25°C (5.4 ± 0.1) पर रहे। माध्यम को 10 सेमी की बाँझ परीक्षण ट्यूबों में डाला जाता है और 15 मिनट के लिए (121±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है। पोषक माध्यम वाले टेस्ट ट्यूबों को 30 दिनों से अधिक समय तक (4±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर संग्रहित किया जाता है।

3.2.13. रोगोसा अगर माध्यम पैराग्राफ 3.2.12 में वर्णित नुस्खा के अनुसार 20.0 ग्राम अगर मिलाकर तैयार किया जाता है। घटकों को घोलने के बाद, माध्यम को बाँझ फ्लास्क में डाला जाता है और 15 मिनट के लिए (121±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है। तैयार माध्यम को (4±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 30 दिनों से अधिक समय तक संग्रहीत नहीं किया जाता है।

3.2.14. टमाटर का जूस मीडियम के अनुसार तैयार किया जाता है गोस्ट 10444.1.

3.2.15. स्यूडोकैटलेज़ के निर्धारण के लिए माध्यम: 1 डीएम वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में 5.0* पेप्टोन, 25 सेमी यीस्ट अर्क, 0.5 सेमी ट्वीन-80, 0.1 ग्राम (MnSO 4HO), 0.5 ग्राम ग्लूकोज, 15 ग्राम अगर डालें और इसमें मांस-पेप्टोन शोरबा मिलाएं। चिह्नित करें, पानी के स्नान में गर्म करके घटकों को घोलें और पीएच सेट करें ताकि नसबंदी के बाद यह 25 डिग्री सेल्सियस (6.9 ± 0.1) पर हो। माध्यम को 5-7 सेमी परीक्षण ट्यूबों में डाला जाता है और 15 मिनट के लिए (121±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक आटोक्लेव में निर्जलित किया जाता है। स्टरलाइज़ेशन के बाद, शॉल्स प्राप्त करने के लिए ट्यूबों को एक झुकी हुई सतह पर रखा जाता है।
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* दस्तावेज़ का पाठ मूल से मेल खाता है। - डेटाबेस निर्माता का नोट.

3.2.16. ली पर्यावरण:

माध्यम का आधार - 10.0 ग्राम पेप्टोन, 50 सेमी खमीर अर्क, 5.0 ग्राम लैक्टोज, 3.0 ग्राम कैल्शियम कार्बोनेट, द्वारा निष्फल गोस्ट 10444.1, 0.5 ग्राम NaHPO, 18 ग्राम अगर, निशान पर आसुत जल मिलाएं, पानी के स्नान में गर्म करके घटकों को घोलें और पीएच को समायोजित करें ताकि नसबंदी के बाद यह 25 डिग्री सेल्सियस (7.0 ± 1) पर हो। माध्यम को एक आटोक्लेव में (121±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 20 मिनट के लिए निष्फल किया जाता है और, यदि आवश्यक हो, तो 30 दिनों से अधिक के लिए (4±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर संग्रहीत किया जाता है।

पोषक तत्व माध्यम तैयार करने के लिए, आधार के 1 ग्राम/डीएम से 1 डीएम की द्रव्यमान सांद्रता के साथ ब्रोमोक्रेसोल पर्पल के बाँझ घोल का 20 सेमी जोड़ें, मिश्रण करें और पेट्री डिश में डालें। माध्यम को (4±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 7 दिनों से अधिक समय तक संग्रहीत नहीं किया जाता है।

3.3. किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर संस्कृतियों, जीवाणु सांद्रता और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी के परीक्षण के लिए पोषक तत्व मीडिया की तैयारी

3.3.1. हाइड्रोलाइज्ड दूध तैयार करना

प्राकृतिक या पुनर्गठित मलाई रहित दूध को 20 मिनट तक उबाला जाता है या बहती भाप से उपचारित किया जाता है और (45±2) डिग्री सेल्सियस के तापमान तक ठंडा किया जाता है। सक्रिय अम्लता को 40% NaOH के द्रव्यमान अंश के साथ एक जलीय घोल जोड़कर pH (7.7±0.1) पर समायोजित किया जाता है। 1000 मिलीलीटर दूध में 0.5 से 1.0 ग्राम पैनक्रिएटिन पाउडर मिलाएं। फिर दूध में 5 से 6 सेमी क्लोरोफॉर्म मिलाया जाता है। फ्लास्क को कॉर्क स्टॉपर से बंद कर दिया जाता है और 18-24 घंटों के लिए (40±2) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर रखा जाता है, पहले 3-5 घंटों के दौरान, दूध को 2-3 बार हिलाया जाता है (स्टॉपर को थोड़ा बाद में खोला जाता है)। क्लोरोफॉर्म हटाने के लिए हिलाना)।

फिर हाइड्रोलाइज्ड दूध को एक पेपर फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है, 1: 1 के अनुपात में आसुत जल से पतला किया जाता है, सक्रिय अम्लता पीएच को समायोजित किया जाता है (7.1 ± 0.1), 40% NaOH के द्रव्यमान अंश के साथ एक जलीय घोल मिलाया जाता है और उपयोग किया जाता है हाइड्रोलाइज्ड दूध से अगर तैयार करना। भंडारण के मामले में, हाइड्रोलाइज्ड दूध को 15 मिनट के लिए (121±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है।

3.3.2. हाइड्रोलाइज्ड दूध से अगर तैयार करना

मिश्रण:

1000 मिलीलीटर हाइड्रोलाइज्ड दूध में 15 ग्राम अगर मिलाएं। माध्यम को तब तक गर्म किया जाता है जब तक कि एगर पूरी तरह से पिघल न जाए और रूई के माध्यम से फ़िल्टर न हो जाए, टेस्ट ट्यूब या फ्लास्क में डाला जाए और (10±1) मिनट के लिए (121±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक आटोक्लेव में निष्फल कर दिया जाए।

3.3.3. बाँझ मलाई निकाला हुआ दूध तैयार करना

प्राकृतिक या पुनर्गठित मलाई रहित दूध को 10 सेमी ट्यूबों में डाला जाता है और (121±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर (10±1) मिनट के लिए निष्फल किया जाता है।

4. परीक्षण का संचालन

4.1. खाद्य उत्पादों का परीक्षण (किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर कल्चर, जीवाणु सांद्रण और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी को छोड़कर)

4.1.1. सूक्ष्मजीवों का निर्धारण करने के लिए, उत्पाद के तैयार नमूने या उसके मूल तनुकरण का उपयोग करें।

पेट्री डिश पर सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति निर्धारित करने और उनकी संख्या की गणना करने के लिए, किसी खाद्य उत्पाद के नमूने से या किसी विशिष्ट के लिए नियामक और तकनीकी दस्तावेज में निर्दिष्ट सूक्ष्मजीवों की अनुमेय संख्या के अनुसार प्रारंभिक कमजोर पड़ने की एक श्रृंखला तैयार की जाती है। खाद्य उत्पाद का प्रकार.

खाद्य उत्पाद के नमूने से एनएफपी की गणना करने के लिए, प्रारंभिक और दस गुना तनुकरण की एक श्रृंखला तैयार करें ताकि उच्चतम तनुकरण की संस्कृतियों में सूक्ष्मजीवों का पता न चले। बुआई के लिए कम से कम तीन क्रमिक तनुकरणों का चयन किया जाता है। प्रत्येक तनुकरण से तीन समानांतर ट्यूबों को टीका लगाया जाता है।

4.1.2. एनएचएफ विधि का उपयोग करके तरल मीडिया में और गहरी विधि का उपयोग करके पेट्री डिश पर बुवाई के लिए, उत्पाद के तैयार नमूने का 1.0 सेमी और (या) इसका पतलापन लिया जाता है, सतह विधि का उपयोग करके पेट्री डिश पर बुवाई के लिए - 0.1-0.2 सेमी .

गहरी या सतही विधियों के साथ-साथ झिल्ली निस्पंदन का उपयोग करके बुआई की जाती है गोस्ट 26670.

झिल्ली फ़िल्टर विधि का उपयोग करते समय, तरल उत्पाद की मात्रा फ़िल्टर की जाती है, जो एक विशिष्ट प्रकार के खाद्य उत्पाद के लिए नियामक और तकनीकी दस्तावेज़ीकरण में इंगित की जाती है।

4.1.3. कम आवृत्ति वाले लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति या संख्या निर्धारित करने के लिए, खंड 3.2.2, 3.2.6 या 3.2.12 में निर्दिष्ट तरल मीडिया में से एक पर टीकाकरण किया जाता है।

यदि, उत्पाद को ब्लिकफेल्ट माध्यम में जोड़ने के बाद, माध्यम का रंग बदल जाता है, तो मूल रंग बहाल होने तक 50 ग्राम/डीएम3 की द्रव्यमान सांद्रता के साथ एक बाँझ क्षार समाधान (NaOH या KOH) की कुछ बूँदें जोड़ें।

लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति निर्धारित करने या उनकी संख्या की गणना करने के लिए, तरल मीडिया में बोने के बजाय, खंड 3.2.1, 3.2.5, 3.2.7 में निर्दिष्ट अगर मीडिया में से किसी एक में गहरी विधि का उपयोग करके टीका लगाने की अनुमति है। , 3.2.13 या 3.2.14.

जीनस लैक्टोबैसिलस के एनएचएफ बैक्टीरिया की उपस्थिति या संख्या निर्धारित करने के लिए, खंड 3.2.6 या 3.2.12 में निर्दिष्ट तरल मीडिया में से एक पर टीकाकरण किया जाता है।

जीनस लैक्टोबैसिलस के जीवाणुओं की उपस्थिति निर्धारित करने या उनकी संख्या गिनने के लिए, तरल मीडिया में टीका लगाने के बजाय, पैराग्राफ 3.2.7 या 3.2.13 में निर्दिष्ट अगर मीडिया में से किसी एक में गहरी विधि का उपयोग करके टीका लगाएं।

जीनस ल्यूकोनोस्टोक के बैक्टीरिया की उपस्थिति निर्धारित करने के लिए, पैराग्राफ 3.2.4 में निर्दिष्ट तरल माध्यम पर टीकाकरण किया जाता है।

उपस्थिति का निर्धारण करने के लिए, एक तरल माध्यम का उपयोग करने के बजाय, साथ ही पेट्री डिश पर जीनस ल्यूकोनोस्टोक के बैक्टीरिया की संख्या की गणना करने या झिल्ली निस्पंदन विधि का उपयोग करने के लिए, पैराग्राफ 3.2.10 में निर्दिष्ट अगर माध्यम पर सतह विधि का उपयोग करके टीका लगाएं। .

जीनस स्ट्रेप्टोकोकस के समूह एन स्ट्रेप्टोकोकी की उपस्थिति निर्धारित करने या संख्या की गणना करने के लिए, खंड 3.2.11 में निर्दिष्ट अगर माध्यम में गहरी विधि का उपयोग करके टीकाकरण किया जाता है, और एस.थर्मोफिलस के लिए, खंड 3.2.16 के अनुसार माध्यम प्रयोग किया जाता है।

जीनस पेडियोकोकस के बैक्टीरिया की उपस्थिति या संख्या निर्धारित करने के लिए, पैराग्राफ 3.2.3 में निर्दिष्ट अगर माध्यम में गहरी बुआई की जाती है।

4.1.4. लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति निर्धारित करने या उनकी संख्या की गणना करने के लिए संस्कृतियों, जीनस स्ट्रेप्टोकोकस के समूह एन के जीनस लैक्टोबैसिलस स्ट्रेप्टोकोकी के बैक्टीरिया को (30±1) डिग्री सेल्सियस या इससे अधिक के तापमान पर 5 दिनों से अधिक नहीं रखा जाता है। (37±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 3 दिन; जीनस ल्यूकोनोस्टोक के जीवाणुओं की उपस्थिति निर्धारित करने या उनकी संख्या गिनने के लिए फसलों को (22±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 5 दिनों से अधिक नहीं रखा जाता है। एस थर्मोफिलस की उपस्थिति या संख्या निर्धारित करने के लिए संस्कृतियों को (45 ± 1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर (48 ± 3) घंटे ऊष्मायन किया जाता है। जीनस ल्यूकोनोस्टोक के जीवाणुओं की उपस्थिति या गिनती निर्धारित करने के लिए पेट्री डिश पर टीकाकरण नीचे की ओर से किया जाता है।

जब वृद्धि के स्पष्ट लक्षण दिखाई देने लगें तो तरल माध्यम में फसलों का ऊष्मायन रोक दिया जाता है।

अगर मीडिया पर कॉलोनियों की प्रारंभिक गणना 48 घंटों के बाद की जाती है।

4.1.5. अगर मीडिया पर फसलों में लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति निर्धारित करने या उनकी संख्या की गणना करने के लिए, जीनस लैक्टोबैसिलस के बैक्टीरिया, जीनस स्ट्रेप्टोकोकस, एस.थर्मोफिलस के समूह एन के पेडियोकोकस स्ट्रेप्टोकोकी, पहुंच सीमित है गोस्ट 30425या निम्नलिखित में से किसी एक तरीके से:

पेट्री डिश में जमे हुए पोषक माध्यम पर 5.0 सेमी की मात्रा में पिघले और (45±1) डिग्री सेल्सियस तक ठंडा किए गए माध्यम की दूसरी परत डालें और कठोर होने तक छोड़ दें;

पेट्री डिश को 95% एन और 5% सीओ युक्त गैस वातावरण में रखा जाता है;

पेट्री डिश को एनारोस्टेट में रखा जाता है। डिवाइस बंद है और वैक्यूम पंप का उपयोग करके 86.6-93.3 kPa का वैक्यूम बनाया जाता है;

लगभग 2 सेमी ऊंचा स्तंभ प्राप्त करने के लिए आवश्यक मात्रा में तरल माध्यम के साथ प्रत्येक परीक्षण ट्यूब में बाँझ तरल पैराफिन मिलाया जाता है।

4.1.6. तरल मीडिया पर कल्चर की प्रतिदिन जांच की जाती है और विकास के दृश्यमान संकेतों वाली नलियों का चयन किया जाता है। तरल मीडिया पर वृद्धि की प्रकृति परिशिष्ट 2 में दी गई है। वृद्धि के संकेतों के साथ परीक्षण ट्यूबों से, उपसंस्कृति को अगर मीडिया पर बैक्टीरियोलॉजिकल लूप के साथ किया जाता है (पैराग्राफ 4.1.3 देखें) ताकि पृथक कॉलोनियों की वृद्धि प्राप्त की जा सके। फसलें खंड 4.1.4 के अनुसार उगाई जाती हैं।

4.1.7. ऊष्मायन के बाद, अगर मीडिया पर टीकाकरण की जांच की जाती है और गिनती के लिए पेट्री डिश का चयन किया जाता है, जिस पर 15 से 150 विशिष्ट कॉलोनियां विकसित हुई हैं।

झिल्ली फिल्टर विधि का उपयोग करके सूक्ष्मजीवों की संख्या निर्धारित करते समय, यदि फिल्टर पर 15 से कम विशिष्ट कॉलोनियां विकसित हुई हैं, तो गिनती के लिए पेट्री डिश का चयन करने की अनुमति दी जाती है।

विशिष्ट उपनिवेशों की विशेषताएँ परिशिष्ट 2 में दी गई हैं।

4.1.8. यह पुष्टि करने के लिए कि विशिष्ट कॉलोनियां लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों या जेनेरा लैक्टोबैसिलस, ल्यूकोनोस्टोक, पेडियोकोकस, जीनस स्ट्रेप्टोकोकस, एस.थर्मोफिलस के समूह एन स्ट्रेप्टोकोकी में से किसी एक के बैक्टीरिया से संबंधित हैं, कम से कम 5 विशिष्ट कॉलोनियों को खंड 4.1 के अनुसार फसलों से चुना जाता है। 7 या 4.1.6. प्रत्येक चयनित कॉलोनी का कुछ सूक्ष्मजीवों से संबंध ग्राम धुंधलापन, गतिशीलता, कैटालेज़ की उपस्थिति के संबंध में स्थापित किया जाता है; इसके अलावा, जीनस ल्यूकोनोस्टोस के बैक्टीरिया की पहचान करते समय, एस.थर्मोफिलस प्रजाति के स्ट्रेप्टोकोकी की पहचान करते समय कैप्सूल की उपस्थिति निर्धारित की जाती है; और जीनस स्ट्रेप्टोकोकस के समूह एन के स्ट्रेप्टोकोकी - पीएच 9.6 के साथ मांस-पेप्टोन शोरबा में वृद्धि की उपस्थिति और 6.5% NaCl के साथ मांस पेप्टोन शोरबा में वृद्धि की उपस्थिति।

4.1.8.1. ग्राम स्टेनिंग में सूक्ष्मजीवों का अनुपात निर्धारित करने के लिए, कॉलोनियों से स्मीयर तैयार किए जाते हैं और तदनुसार दाग लगाए जाते हैं गोस्ट 30425और माइक्रोस्कोप.

4.1.8.2. कालोनियों से सूक्ष्मजीवों की गतिशीलता का अध्ययन करने के लिए, हैंगिंग या क्रश्ड ड्रॉप विधि का उपयोग करके तैयारी तैयार की जाती है और सूक्ष्मदर्शी से जांच की जाती है। माइक्रोस्कोपी के परिणामों का मूल्यांकन परिशिष्ट 1 के अनुसार किया जाता है।

4.1.8.3. संस्कृतियों की कैटालेज़ गतिविधि किसके द्वारा निर्धारित होती है? गोस्ट 30425.

कैटालेज़ गतिविधि के निर्धारण के परिणामों का मूल्यांकन परिशिष्ट 1 के अनुसार किया जाता है।

जीनस पेडियोकोकस के बैक्टीरिया में हाइड्रोजन पेरोक्साइड का अपघटन एंजाइम स्यूडोकैटलेज़ के कारण संभव है। इसलिए, लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों या जीनस पेडियोकोकस के बैक्टीरिया का निर्धारण करते समय, यदि सकारात्मक कैटालेज़ प्रतिक्रिया देने वाले ग्राम-पॉजिटिव, गैर-गतिशील सूक्ष्मजीव विशिष्ट कॉलोनियों में पाए जाते हैं, तो साइटोक्रोम की अनुपस्थिति को बेंज़िडाइन परीक्षण करके नियंत्रित किया जाता है। ऐसा करने के लिए, पेट्री डिश पर उगे 24-48 घंटे पुराने बैक्टीरिया की कॉलोनियों को पैराग्राफ 3.1.9 में निर्दिष्ट बेंज़िडाइन समाधान के साथ डाला जाता है। घोल से कालोनियों को संतृप्त करने के बाद, कप में लगभग समान मात्रा में 5% हाइड्रोजन पेरोक्साइड मिलाया जाता है। जीनस पेडियोकोकस के बैक्टीरिया सहित लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों में साइटोक्रोम नहीं होते हैं। जब साइटोक्रोम मौजूद होते हैं, तो कॉलोनियां नीली-हरी या चमकीली नीली दिखाई देती हैं।

बेंज़िडाइन की अनुपस्थिति में, 0.05% की कम ग्लूकोज सांद्रता के साथ पैराग्राफ 3.2.15 के माध्यम पर स्यूडोकैटलेज़ की उपस्थिति निर्धारित करने की अनुमति है।

फसलों को खंड 4.1.4 के अनुसार ऊष्मायन किया जाता है, स्यूडोकैटलेज़ का निर्धारण उसी तरह किया जाता है जैसे कि कैटालेज़ के अनुसार किया जाता है गोस्ट 30425.

स्यूडोकैटलेज़ उत्पन्न करने वाली संस्कृतियाँ पेडिओकोकस जीनस से संबंधित हैं।

4.1.8.4. जीनस ल्यूकोनोस्टोक के बैक्टीरिया की पहचान करते समय, बैक्टीरिया कैप्सूल की पहचान करने के लिए बरी के अनुसार तैयारी तैयार की जाती है और दाग दिया जाता है। ऐसा करने के लिए, एक अच्छी तरह से डीग्रीज़ किए गए और पके हुए ग्लास स्लाइड पर बैक्टीरिया कल्चर की एक बूंद को बारीक काली स्याही पाउडर या निग्रोसिन सस्पेंशन के साथ मिलाएं।

पॉलिश किए हुए किनारों वाले दूसरे ग्लास का उपयोग करके, एक पतला स्मीयर जल्दी से तैयार किया जाता है, जिसे बर्नर की लौ से कई बार गुजारकर ठीक किया जाता है। स्मीयर को क्रिस्टल वायलेट के घोल या कार्बोल्फुचिन के कार्यशील घोल से रंगा जाता है। पानी के साथ एक बर्तन में सावधानी से धोएं, सूखने के लिए हवा में छोड़ दें और माइक्रोस्कोप के नीचे जांच करें। फिल्टर पेपर की शीटों के बीच स्मीयर को न सुखाएं। तैयारी की पृष्ठभूमि को काली स्याही या निग्रोसिन के पतले निलंबन से चित्रित किया गया है। जीवाणुओं के शरीर एकवर्णी रूप से रंगे होते हैं, कैप्सूल दाग रहित रहते हैं।

4.1.8.5. जीनस स्ट्रेप्टोकोकस के समूह एन स्ट्रेप्टोकोकी, एस.थर्मोफिलस प्रजाति के स्ट्रेप्टोकोकी की पहचान करते समय, विकास की अनुपस्थिति 9.6 के पीएच के साथ मांस-पेप्टोन शोरबा में और 6.5% सोडियम क्लोराइड सामग्री के साथ मांस-पेप्टोन शोरबा में निर्धारित की जाती है।

ऐसा करने के लिए, खंड 4.1.8 के अनुसार फसलों को खंड 3.2.8 और 3.2.9 में निर्दिष्ट मीडिया पर दोबारा लगाया जाता है।

फसलों को 3 दिनों के लिए (30±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर ऊष्मायन किया जाता है, और जब एस.थर्मोफिलस की पहचान की जाती है, तो फसलों को 3 दिनों के लिए (45±1) डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है।

4.2. किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर कल्चर, जीवाणु सांद्रण और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी का परीक्षण करना

4.2.1. किण्वित दूध उत्पादों (सूखा और तरल) के अनुसार पतलापन तैयार करना गोस्ट 9225.

स्टार्टर कल्चर, बैक्टीरियल सांद्रण और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की बैक्टीरियल तैयारी तैयार करने के लिए, बोतल और बैग के किनारों को अल्कोहल से पोंछा जाता है, बोतल के किनारे को जला दिया जाता है और स्टॉपर हटा दिया जाता है, बैग के किनारे को काट दिया जाता है ज्वलनशील कैंची, 1 ग्राम परीक्षण सामग्री को एक बाँझ या ज्वलनशील मोर्टार में तौला जाता है, पेट्री डिश या बाँझ कागज के ढक्कन से ढक दिया जाता है, अच्छी तरह से पीस लिया जाता है, 99 सेमी वाले फ्लास्क से थोड़ी मात्रा में सोडियम क्लोराइड समाधान या फॉस्फेट बफर मिलाया जाता है। समाधान या बफर का. निलंबित सामग्री को शेष सोडियम क्लोराइड या फॉस्फेट बफर समाधान के साथ एक फ्लास्क में डाला जाता है और 1:100 का दूसरा तनुकरण प्राप्त किया जाता है।

किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर संस्कृतियों, जीवाणु सांद्रता और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी के दूसरे तनुकरण से, तालिका 1 का उपयोग करके नियामक और तकनीकी दस्तावेज में निर्दिष्ट लैक्टिक एसिड जीवाणुओं की संख्या के अनुसार निम्नलिखित तनुकरण तैयार करें।

तालिका नंबर एक

4.2.2. लैक्टिक एसिड स्ट्रेप्टोकोक्की की संख्या गिनने के लिए बुआई पैराग्राफ 3.3.2 और 3.3.3 के अनुसार तैयार किए गए अगर या तरल पोषक माध्यम में की जाती है, और लैक्टिक एसिड छड़ों की संख्या गिनने के लिए बुआई एक तैयार तरल माध्यम में की जाती है पैराग्राफ 3.3.3 के अनुसार.

अगर पोषक माध्यम में बुआई के लिए, उन तनुकरणों का चयन करें, जो बोने पर, प्लेटों पर 15 से 150 कालोनियों तक बढ़ जाते हैं।

प्रत्येक नमूने को टीका लगाया जाता है गोस्ट 9225पेट्री डिश में उत्पाद के उचित तनुकरण का 1 सेमी (तालिका 1 देखें)।

पिछले तीन से चार तनुकरण (तालिका 1 देखें) को तरल पोषक माध्यम में बोते समय, प्रत्येक तनुकरण का 1 सेमी बाँझ मलाई रहित दूध के साथ दो समानांतर ट्यूबों में डालें।

4.2.3. कल्चर वाली टेस्ट ट्यूब या पेट्री डिश को थर्मोस्टेट में रखा जाता है और मेसोफिलिक लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की गिनती के लिए (30±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर, थर्मोफिलिक लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की गिनती के लिए (40±1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर इनक्यूबेट किया जाता है और मेसोफिलिक और थर्मोफिलिक लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की संयुक्त गणना के लिए (32±1) डिग्री सेल्सियस पर। फसलों को 72 घंटों तक ऊष्मायन किया जाता है।

5. प्रसंस्करण परिणाम

5.1. खाद्य उत्पाद विश्लेषण परिणामों का प्रसंस्करण (किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर संस्कृतियों, जीवाणु सांद्रता, लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी को छोड़कर)

5.1.1. खाद्य उत्पाद विश्लेषण के परिणामों का प्रत्येक नमूने के लिए अलग से मूल्यांकन किया जाता है।

5.1.2. यदि, निर्धारित करते समय सांस्कृतिक, रूपात्मक और जैव रासायनिक गुणों का अध्ययन करते समय:

लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीव, ग्राम-पॉजिटिव, नॉन-मोटाइल, कैटालेज-नेगेटिव रॉड्स या नॉन-बीजाणु-गठन, ग्राम-पॉजिटिव, नॉन-मोटाइल, कैटालेज-नेगेटिव या स्यूडोकैटलेज-गठन करने वाले कोक्सी पाए जाते हैं, तो हम निष्कर्ष निकालते हैं कि पता लगाए गए सूक्ष्मजीव संबंधित हैं लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों के लिए;

जीनस लैक्टोबैसिलस के बैक्टीरिया गैर-बीजाणु-निर्माण, ग्राम-पॉजिटिव, गैर-गतिशील, कैटालेज-नकारात्मक छड़ पाए गए, तो यह निष्कर्ष निकाला गया कि पाए गए सूक्ष्मजीव जीनस लैक्टोबैसिलस से संबंधित हैं;

जीनस ल्यूकोनोस्टोक के बैक्टीरिया गैर-बीजाणु-गठन, ग्राम-पॉजिटिव, गैर-गतिशील, कैटालेज़-नकारात्मक पाए गए, जो एक कोक्सी कैप्सूल से घिरे हुए थे, तो हम निष्कर्ष निकालते हैं कि पाए गए सूक्ष्मजीव जीनस ल्यूकोनोस्टोक से संबंधित हैं;

जीनस स्ट्रेप्टोकोकस समूह एन के बैक्टीरिया गैर-बीजाणु-निर्माण, ग्राम-पॉजिटिव, नॉनमोटाइल, कैटालेज-नेगेटिव, कोक्सी पाए गए, जो पीएच 9.6 और 6.5% NaCl के साथ पोषक तत्व मीडिया में नहीं बढ़ते हैं, तो हम निष्कर्ष निकालते हैं कि पता चला है सूक्ष्मजीव जीनस स्ट्रेप्टोकोकस समूह एन से संबंधित हैं;

जीनस पेडियोकोकस के बैक्टीरिया गैर-बीजाणु-निर्माण, ग्राम-पॉजिटिव, नॉनमोटाइल, कैटालेज-नेगेटिव (या कैटालेज-पॉजिटिव, लेकिन एक नकारात्मक बेंज़िडाइन परीक्षण दे रहे हैं) या स्यूडोकैटलेज़-पॉजिटिव कोक्सी पाए जाते हैं, तो हम निष्कर्ष निकालते हैं कि पाए गए सूक्ष्मजीव पेडियोकोकस जीनस से संबंधित हैं;

एस. थर्मोफिलस प्रजाति के बैक्टीरिया गैर-बीजाणु-निर्माण, ग्राम-पॉजिटिव, गैर-गतिशील, कैटालेज-नकारात्मक, थर्मोफिलिक कोक्सी पाए गए जो 9.6 और 6.5% NaCl के पीएच के साथ पोषक तत्व मीडिया में नहीं बढ़ते हैं, हम निष्कर्ष निकालते हैं पता चला कि पाए गए सूक्ष्मजीव स्ट्रेप्टोकोकस थर्मोफिलस प्रजाति के हैं।

5.1.3. यदि, जब 80% मामलों में विशिष्ट कालोनियों की पुष्टि हो जाती है, यानी 5 में से कम से कम 4 कालोनियों में, सूक्ष्मजीवों के कुछ समूहों या जेनेरा की वृद्धि की पुष्टि हो जाती है, तो यह माना जाता है कि डिश पर उगाई गई सभी विशिष्ट कालोनियां संबंधित हैं इस समूह, जीनस या प्रजाति के लिए। अन्य मामलों में, पुष्टि के लिए ली गई विशिष्ट कॉलोनियों की कुल संख्या में पुष्टि की गई कॉलोनियों के प्रतिशत के आधार पर सूक्ष्मजीवों की संख्या निर्धारित की जाती है।

5.1.4. एनएफपी का निर्धारण करते समय या किसी उत्पाद को तरल मीडिया पर टीका लगाते समय, ट्यूबों को सकारात्मक माना जाता है यदि, अगर मीडिया पर बाद के उपसंस्कृति और विशेषता कॉलोनियों की पुष्टि पर, परिभाषित समूहों, जेनेरा या प्रजातियों के सूक्ष्मजीव कम से कम एक विशेषता कॉलोनी में पाए जाते हैं।

5.1.5. सूक्ष्मजीवों की सबसे संभावित संख्या (एमपीएन) सकारात्मक ट्यूबों की संख्या के अनुसार निर्धारित की जाती है गोस्ट 30425.

यदि टीकाकरण के लिए चुने गए दस गुना तनुकरण अधिक थे, उदाहरण के लिए 10, 10 और 10, तो एनएचएफ का सारणीबद्ध मूल्य चयनित और सारणीबद्ध दस गुना तनुकरण के बीच के अंतर से गुणा किया जाता है, अर्थात 100 से।

यदि बुआई के लिए चुने गए दस गुना तनुकरण कम थे, उदाहरण के लिए 10 (1 ग्राम), 10, 10, तो एनएचएफ के सारणीबद्ध मूल्य को चयनित और सारणीबद्ध दस गुना तनुकरण के बीच के अंतर से विभाजित किया जाता है, अर्थात 10 से। .

5.1.6. पेट्री डिश या एनएचएफ विधि में टीकाकरण या झिल्ली निस्पंदन विधि का उपयोग करके सूक्ष्मजीवों की संख्या निर्धारित करने के परिणाम प्रति 1 ग्राम या 1 सेमी उत्पाद की पुनर्गणना की जाती है और आवश्यकताओं के अनुसार दर्ज की जाती है। गोस्ट 26670.

5.1.7. उत्पाद के एक निश्चित नमूने में सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति का निर्धारण करने के परिणाम निम्नानुसार व्यक्त किए जाते हैं: उत्पाद के नमूने में लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीव (यदि आवश्यक हो, जीनस या प्रजाति का संकेत दिया गया है) का पता लगाया जाता है या नहीं पाया जाता है।

5.2. किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर संस्कृतियों, जीवाणु सांद्रता और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी के विश्लेषण के परिणामों को संसाधित करना

5.2.1. जब लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया एक तरल माध्यम-दूध-में विकसित होते हैं तो दूध जम जाता है।

लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया (स्ट्रेप्टोकोक्की और बेसिली) की कुल संख्या की गणना करने के लिए, अंतिम तीन तनुकरण जिनमें दूध फटा है, को नोट किया जाता है।

एक संख्यात्मक विशेषता बनाओ. इसमें तीन संख्याएँ होती हैं जो अंतिम तीन तनुकरणों को दर्शाती हैं। संख्यात्मक विशेषता का पहला अंक उस तनुकरण से मेल खाता है जिस पर दूध दो परखनलियों में जम गया। निम्नलिखित संख्याएँ बाद के दो तनुकरणों में फटे हुए दूध के साथ टेस्ट ट्यूबों की संख्या दर्शाती हैं।

तालिका 2 में संख्यात्मक विशेषता का उपयोग करते हुए, लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों की सबसे संभावित संख्या पाई जाती है, जिसे उस तनुकरण से गुणा किया जाता है जहां से संख्यात्मक विशेषता का पहला अंक शुरू होता है।

तालिका 2

अस्वीकार्य संयोजन तालिका में शामिल नहीं हैं.

परिणामी संख्या 1 ग्राम या 1 सेमी उत्पाद में लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया कोशिकाओं की संख्या से मेल खाती है।

जब दो समानांतर ट्यूब संक्रमित होते हैं तो सूक्ष्मजीवों की सबसे संभावित संख्या की गणना करने का एक उदाहरण परिशिष्ट 3 में दिया गया है।

यदि स्ट्रेप्टोकोकी और बेसिली की संख्या को अलग-अलग निर्धारित करना आवश्यक है, तो परीक्षण ट्यूबों से एक सूक्ष्म तैयारी की जाती है जिसमें दूध फट गया है। गोस्ट 9225, इसे देखें और उन परखनलियों को अलग से चिह्नित करें जिनमें छड़ें और स्ट्रेप्टोकोकी हैं।

लैक्टिक एसिड स्ट्रेप्टोकोकी या बेसिली की संख्या की गणना ऊपर बताए अनुसार की जाती है।

5.2.2. अगर माध्यम पर लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की विकसित कॉलोनियों की संख्या की गणना करना और उत्पाद के 1 ग्राम या 1 सेमी में उनकी सामग्री की पुनर्गणना के अनुसार किया जाता है। गोस्ट 9225.

परिशिष्ट 1 (संदर्भ के लिए)। सूक्ष्मजीवों के लक्षण

परिशिष्ट 1
जानकारी

परिशिष्ट 2 (संदर्भ के लिए)। कृषिकृत पर लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीव कालोनियों की विशेषताएं और तरल मीडिया पर विकास की प्रकृति

परिशिष्ट 2
जानकारी

परिशिष्ट 3 (संदर्भ के लिए)। सीमित तनुकरण विधि का उपयोग करके लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की सबसे संभावित संख्या की गणना का उदाहरण

परिशिष्ट 3
जानकारी

एक संख्यात्मक विशेषता बनाओ. इसमें तीन संख्याएँ होती हैं जो पिछले तीन तनुकरणों में फटे मलाई रहित दूध के साथ टेस्ट ट्यूबों की संख्या दर्शाती हैं। संख्यात्मक विशेषता का पहला अंक (बाईं ओर) 2 है (1:100 तनुकरण की 2 परीक्षण ट्यूबों को रोल किया गया था), दूसरा 1 है और तीसरा 1 है।

इसलिए, संख्यात्मक विशेषता 211 होगी। तालिका 2 के अनुसार, यह संख्या 13.0 से मेल खाती है। इस संख्या को उस तनुकरण से गुणा किया जाना चाहिए जिससे संख्यात्मक विशेषता का पहला अंक शुरू हुआ (उदाहरण में, यह तनुकरण 1:100 है)।

इस प्रकार, 1 सेमी में 1300 लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया (13.0x100=1300) होते हैं।

तनुकरण द्वारा गुणा करने पर हमें 1 सेमी में स्ट्रेप्टोकोकी की संख्या - 7000, छड़ - 250 प्राप्त होती है।

इलेक्ट्रॉनिक दस्तावेज़ पाठ
कोडेक्स जेएससी द्वारा तैयार किया गया और इसके विरुद्ध सत्यापित किया गया:
आधिकारिक प्रकाशन
खाद्य उत्पाद, डिब्बाबंद भोजन।
सूक्ष्मजीवविज्ञानी विश्लेषण विधियाँ:
बैठा। गोस्ट। - एम.: स्टैंडआर्टिनफॉर्म, 2010

गोस्ट 10444.11-89

अंतरराज्यीय मानक

खाद्य उत्पाद

लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों के निर्धारण के लिए तरीके

आधिकारिक प्रकाशन

मानकसूचना

यूडीसी 663/.665.3.001.4:006.354

अंतरराज्यीय

समूह H09

मानक

खाद्य उत्पाद लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों के निर्धारण के तरीके

खाद्य उत्पाद। लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया के निर्धारण के लिए तरीके

एमकेएस 07.100.30 ओकेएसटीयू 9109

परिचय दिनांक 01/01/91

यह मानक भोजन और किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर संस्कृतियों, जीवाणु सांद्रता और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी पर लागू होता है और व्यवहार्य लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों और उनकी सबसे संभावित संख्या (एमपीएन) निर्धारित करने के लिए एक विधि स्थापित करता है, साथ ही खाद्य उत्पादों में निर्धारण के तरीके भी स्थापित करता है। (किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर कल्चर, बैक्टीरियल सांद्रण और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी को छोड़कर) जेनेरा लैक्टोबैसिलस, ल्यूकोनोस्टोक, जीनस स्ट्रेप्टोकोकस, पेडियोकोकस, एस थर्मोफिलस के समूह एन स्ट्रेप्टोकोकी के बैक्टीरिया और सबसे संभावित संख्या (एमपीएन) का निर्धारण ) जीनस लैक्टोबैसिलस के बैक्टीरिया का।

यह विधि उत्पाद की एक निश्चित मात्रा को बोने और (या) इसे तरल या अगर चयनात्मक पोषक मीडिया में पतला करने, इष्टतम परिस्थितियों में फसलों की खेती करने और यदि आवश्यक हो, तो पाए गए सूक्ष्मजीवों के रूपात्मक और जैव रासायनिक गुणों का निर्धारण करने और उनकी गिनती करने पर आधारित है। .

यह विधि इसके लिए अभिप्रेत है:

विनियामक और तकनीकी दस्तावेज़ीकरण की आवश्यकताओं के साथ भोजन और किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर संस्कृतियों, जीवाणु सांद्रता और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी के सूक्ष्मजीवविज्ञानी गुणवत्ता संकेतकों का अनुपालन स्थापित करना;

डिब्बाबंद भोजन की औद्योगिक बाँझपन स्थापित करना;

खाद्य दोषों के कारणों की पहचान करना।

1. नमूना चयन और तैयारी

1.1. GOST 26668, 26669 के अनुसार, किण्वित दूध को छोड़कर, खाद्य उत्पादों के नमूनों का चयन और तैयारी।

किण्वित दूध उत्पादों (सूखा और तरल), स्टार्टर कल्चर, जीवाणु सांद्रण और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी का नमूना लेना और उन्हें विश्लेषण के लिए तैयार करना - GOST 9225 * * के अनुसार।

1.2. GOST 8756.18 के अनुसार डिब्बाबंद भोजन की लीक की जाँच की जाती है।

पूर्ण डिब्बाबंद भोजन, दिखने में सामान्य, परीक्षण से पहले कम से कम 5 दिनों के लिए 1 डीएम 3 तक की क्षमता वाले कंटेनरों में 30-37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टेट किया जाता है, 1 डीएम 3 से अधिक की क्षमता वाले कंटेनरों में - कम से कम के लिए 7 दिन।

खाद्य उत्पाद जिनमें लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों की संख्या मानकीकृत है, थर्मोस्टेटिंग के अधीन नहीं हैं।

GOST 26669 के अनुसार पेप्टोन-सलाइन समाधान का उपयोग करके उत्पाद तनुकरण तैयार किया जाता है।

5% से अधिक NaCl के द्रव्यमान अंश वाले उत्पादों का प्रारंभिक तनुकरण पेप्टोन पानी का उपयोग करके तैयार किया जाता है; मछली और मांस उत्पादों का प्रारंभिक पतलापन खारे घोल का उपयोग करके तैयार किया जाता है।

* रूसी संघ के क्षेत्र में GOST R 53430-2009 लागू है।

आधिकारिक प्रकाशन पुनरुत्पादन निषिद्ध है

© स्टैंडर्ड पब्लिशिंग हाउस, 1989 © स्टैंडर्डडिनफॉर्म, 2010

2. उपकरण, सामग्री और अभिकर्मक

परीक्षण करने के लिए उपकरण, सामग्री, अभिकर्मकों का उपयोग GOST 10444.1, GOST 9225 और निम्नलिखित के अनुसार किया जाता है:

GOST 24104* के अनुसार मेट्रोलॉजिकल विशेषताओं के साथ सामान्य प्रयोजन प्रयोगशाला तराजू, 200 ग्राम तक की अधिकतम वजन सीमा और ±2 मिलीग्राम (अभिकर्मकों के वजन के लिए) की अनुमेय त्रुटि सीमा के साथ;

GOST 24104* के अनुसार मेट्रोलॉजिकल विशेषताओं के साथ सामान्य प्रयोजन प्रयोगशाला तराजू, 200 ग्राम तक की उच्चतम वजन सीमा और ±15 मिलीग्राम (उत्पाद के वजन के लिए) की अनुमेय त्रुटि सीमा के साथ;

चरण-विपरीत माइक्रोस्कोपी या अन्य समान ब्रांडों के लिए एक उपकरण के साथ जैविक प्रकाश माइक्रोस्कोप; GOST 6672 के अनुसार चश्मा ढकें; GOST 9284 के अनुसार ग्लास स्लाइड;

28-55 डिग्री सेल्सियस के ऑपरेटिंग तापमान रेंज वाला थर्मोस्टेट, जो आपको ± 1 डिग्री सेल्सियस की त्रुटि के साथ निर्धारित तापमान बनाए रखने की अनुमति देता है; GOST 5541 के अनुसार कॉर्क प्लग;

फोल्डिंग पॉकेट आवर्धक कांच, GOST 25706 के अनुसार 4-10 गुना आवर्धन प्रदान करता है; बैक्टीरियल और वायरोलॉजिकल दवाओं के लिए पैनक्रिएटिन; GOST 20015 के अनुसार तकनीकी क्लोरोफॉर्म;

गाय के दूध से प्राप्त 19°T से अधिक अम्लता वाला स्किम्ड दूध, GOST 13264** के अनुसार कम से कम दूसरी श्रेणी का तैयार किया गया या GOST 10970*** के अनुसार स्किम्ड मिल्क पाउडर; एल-आर्जिनिन हाइड्रोक्लोराइड; बेंजिडाइन बेसिक या हाइड्रोक्लोरिक एसिड; पोटेशियम साइट्रेट; कार्बोक्सिलमिथाइलसेलुलोज; जुड़वां-80; नाजिया; अमोनियम साइट्रेट;

मैग्नीशियम सल्फेट (MgS0 4 7H 2 0);

मैंगनीज सल्फेट (MnS0 4 2H 2 0);

मैंगनीज सल्फेट (MnS0 4 4H 2 0);

सौरबिक तेजाब;

निग्रोसिन;

3. परीक्षण के लिए तैयारी

3.1. खाद्य उत्पादों के परीक्षण के लिए अभिकर्मकों और संकेतकों के समाधान की तैयारी (किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर संस्कृतियों, जीवाणु सांद्रता और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी को छोड़कर)

3.1.1. ब्रोमोक्रेसोल पर्पल इंडिकेटर, 1 ग्राम/डीएम 3 की द्रव्यमान सांद्रता वाला घोल: 0.1 ग्राम ब्रोमोक्रेसोल पर्पल, एसेप्टिस के नियमों के अनुपालन में, स्थानांतरित किया जाता है, बाँझ आसुत जल से धोया जाता है, 100 सेमी 3 की क्षमता वाले एक मापने वाले कंटेनर में , और मात्रा को उसी पानी के साथ निशान पर समायोजित किया जाता है। समाधान को कमरे के तापमान पर 3 महीने से अधिक समय तक संग्रहीत नहीं किया जाता है।

3.1.2. कैल्शियम कार्बोनेट, 30 ग्राम/डीएम3 की द्रव्यमान सांद्रता वाला जलीय निलंबन: 3 ग्राम कैल्शियम कार्बोनेट, GOST 10444.1 के अनुसार निष्फल, स्थानांतरित किया जाता है, आसुत जल से धोया जाता है, 100 सेमी3 की क्षमता वाले एक मापने वाले कंटेनर में, और मात्रा होती है निशान के अनुसार समायोजित किया गया। सस्पेंशन को 20 मिनट के लिए (121+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर निष्फल किया जाता है। सस्पेंशन को कमरे के तापमान पर 3 महीने से अधिक समय तक संग्रहीत नहीं किया जाता है।

3.1.3. कार्बोल्फुचिन, संकेंद्रित घोल: 1 ग्राम फुकसिन को 96% एथिल अल्कोहल के 10 सेमी 3 और 50 ग्राम/डीएम 3 की द्रव्यमान सांद्रता के साथ फिनोल समाधान के 100 सेमी 3 के साथ मिलाया जाता है।

कार्बोल्फुचिन का कार्यशील घोल तैयार करने के लिए, कार्बोल्फुचिन के सांद्रित घोल के 10 सेमी 3 में 90 सेमी आसुत जल मिलाएं।

3.1.4. 10 ग्राम/डीएम3 की द्रव्यमान सांद्रता के साथ क्रिस्टल वायलेट समाधान: 1 ग्राम क्रिस्टल वायलेट को स्थानांतरित किया जाता है, आसुत जल से धोया जाता है, 100 सेमी 3 की क्षमता वाले मापने वाले कंटेनर में, मात्रा को निशान पर समायोजित किया जाता है। समाधान को कमरे के तापमान पर 3 महीने से अधिक समय तक संग्रहीत नहीं किया जाता है।

* 1 जुलाई 2002 को GOST 24104-2001 लागू हुआ। GOST R 53228-2008 रूसी संघ के क्षेत्र पर लागू है।

** GOST R 52054-2003 रूसी संघ के क्षेत्र पर लागू है।

*** रूसी संघ के क्षेत्र में GOST R 52791-2007 लागू है।

3.1.5. 100 ग्राम/डीएम3 की द्रव्यमान सांद्रता के साथ निग्रोसिन निलंबन: 10 ग्राम निग्रोसिन को स्थानांतरित किया जाता है, आसुत जल से धोया जाता है, 100 सेमी3 की क्षमता वाले एक मापने वाले कंटेनर में, मात्रा को निशान पर समायोजित किया जाता है, 45- के तापमान पर गरम किया जाता है। पानी के स्नान में 50 डिग्री सेल्सियस, फिर कपास धुंध फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया गया।

3.1.6. पेप्टोन-सलाइन घोल GOST 26669 के अनुसार तैयार किया जाता है।

3.1.7. पेप्टोन पानी GOST 26669 के अनुसार तैयार किया जाता है।

3.1.8. सॉर्बिक एसिड, क्षारीय घोल: 1 ग्राम सॉर्बिक एसिड को स्थानांतरित किया जाता है, NaOH = 1 mol/dm 3 के साथ सोडियम हाइड्रॉक्साइड के घोल से धोया जाता है, 100 सेमी 3 की क्षमता वाले मापने वाले कंटेनर में, मात्रा को निशान पर समायोजित किया जाता है उसी समाधान के साथ. परिणामी घोल को GOST 26670 के अनुसार झिल्ली निस्पंदन द्वारा निष्फल किया जाता है।

इसे अपूतिता के नियमों के अनुपालन में निस्पंदन के बिना सॉर्बिक एसिड का घोल तैयार करने की अनुमति है, जबकि सोडियम हाइड्रॉक्साइड घोल बाँझ आसुत जल में तैयार किया जाता है।

3.1.9. साइटोक्रोम के निर्धारण के लिए अभिकर्मक: 1 ग्राम बेंजिडाइन बेसिक या हाइड्रोक्लोरिक एसिड को 99.8% ग्लेशियल एसिटिक एसिड के 20 सेमी 3 में घोला जाता है, 30 सेमी 3 आसुत जल मिलाया जाता है और धीरे-धीरे गर्म किया जाता है, ठंडा होने के बाद, 96% एथिल के 50 सेमी 3 को मिलाया जाता है। घोल में अल्कोहल मिलाया जाता है। घोल को 1 महीने के लिए रेफ्रिजरेटर में संग्रहित किया जाता है।

3.1.10. खारा घोल GOST 10444.1 के अनुसार तैयार किया जाता है।

3.2. खाद्य उत्पादों के परीक्षण के लिए पोषक तत्व मीडिया की तैयारी (किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर संस्कृतियों, जीवाणु सांद्रता और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी को छोड़कर)

3.2.1. ब्लिकफेल्ड सघन माध्यम GOST 10444.1 के अनुसार तैयार किया गया है।

3.2.2. ब्लिकफेल्ट का माध्यम तरल है: 10 ग्राम लैक्टोज, 10 ग्राम ग्लूकोज, 5 ग्राम पेप्टोन को 950 सेमी 3 आसुत जल में घोला जाता है, उबाला जाता है और एक पेपर फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है। छानने में 20 सेमी 3 खमीर अर्क, 32 सेमी 3 ब्रोमोक्रेसोल बैंगनी घोल मिलाया जाता है। 3.1.1, पीएच को 7.3+0.1 पर सेट करें, स्टेराइल टेस्ट ट्यूब में डालें और 20 मिनट के लिए (117±1)°C के तापमान पर स्टेरलाइज़ करें।

3.2.3. बुधवार ब्रिग्स, शार्प द्वारा संशोधित:

875 सेमी 3 आसुत जल में 15 ग्राम पेप्टोन, 20 ग्राम ग्लूकोज, 25 सेमी 3 खमीर अर्क, 5 ग्राम सोडियम एसीटेट, 5 ग्राम पोटेशियम फॉस्फेट मोनोसबस्टिट्यूटेड, 2 ग्राम अमोनियम साइट्रेट, 100 सेमी 3 टमाटर का रस मिलाएं। (यह मानते हुए कि रस में कम से कम 4.5% घुलनशील ठोस पदार्थ होते हैं, यदि टमाटर के रस में अलग मात्रा में शुष्क पदार्थ होते हैं, तो 4.5% की शुष्क पदार्थ सामग्री की पुनर्गणना करें), 1 सेमी 3 ट्वीन - 80.5 सेमी 3 नमक घोल (एमजीएस0 4 7एच) 2 0 - 11.5 ग्राम, MnS0 4 4H 2 0 - 2.86 ग्राम, FeS0 4 7H 2 0 - 0.68 ग्राम, आसुत जल 100 सेमी 3 तक), 15 ग्राम अगर।

मिश्रण को धीमी आंच पर तब तक उबाला जाता है जब तक कि आगर पूरी तरह से घुल न जाए। पीएच सेट करें ताकि स्टरलाइज़ेशन के बाद यह 25 डिग्री सेल्सियस (6.5 + 0.1) पर हो। माध्यम को 15 मिनट के लिए (115+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर रोगाणुरहित किया जाता है।

3.2.4. खमीर माध्यम: GOST 10444.1 के अनुसार तैयार किए गए 100 सेमी 3 खमीर अर्क में 900 सेमी 3 आसुत जल, 10 ग्राम कैल्शियम कार्बोनेट GOST 10444.1 के अनुसार निष्फल और 100 ग्राम सुक्रोज मिलाएं। मिश्रण को सुक्रोज के घुलने तक गर्म किया जाता है, पीएच को समायोजित किया जाता है ताकि स्टरलाइज़ेशन के बाद यह 25 डिग्री सेल्सियस (7.1 ± 0.1) पर हो, 10 सेमी 3 टेस्ट ट्यूब में डाला जाए और (121 + 1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर स्टरलाइज़ किया जाए। 15 मिनटों।

3.2.5. पत्तागोभी अगर मीडियम GOST 10444.1 के अनुसार तैयार किया जाता है।

3.2.6. तरल एमआरएस माध्यम: 10 ग्राम पेप्टोन, 20 सेमी 3 खमीर अर्क, 20.0 ग्राम ग्लूकोज, 1.0 सेमी 3 ट्वीन - 80, 2.0 ग्राम अप्रतिस्थापित पोटेशियम फॉस्फेट, 5.0 ग्राम सोडियम एसीटेट, 2.0 ग्राम ट्रायमोनियम साइट्रेट, 0.2 ग्राम मैग्नीशियम सल्फेट, 0.05 ग्राम मैंगनीज सल्फेट (MnS0 4 4H 2 0), निशान पर मांस का पानी मिलाएं; पानी के स्नान में गर्म करके घटकों को घोलें और पीएच सेट करें ताकि नसबंदी के बाद यह 25 डिग्री सेल्सियस (6.2 + 0.1) पर हो। माध्यम को 10 सेमी 3 में बाँझ परीक्षण ट्यूबों में डाला जाता है और 15 मिनट के लिए (121+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है। पोषक माध्यम वाले टेस्ट ट्यूबों को 30 दिनों से अधिक समय तक (4+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर संग्रहित किया जाता है।

3.2.7. एमआरएस अगर माध्यम i में निर्दिष्ट नुस्खा के अनुसार तैयार किया जाता है। 3.2.6, 15-18 ग्राम अगर के साथ। घटकों को घोलने के बाद, माध्यम को बाँझ फ्लास्क में डाला जाता है और 15 मिनट के लिए (121+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है। तैयार माध्यम को (4+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 30 दिनों से अधिक समय तक संग्रहीत नहीं किया जाता है।

यदि आवश्यक हो, चयनात्मकता बढ़ाने के लिए, नसबंदी के बाद, 1 डीएम 3 अगर या तरल माध्यम में 1 सेमी 3 क्षारीय सॉर्बिक एसिड घोल मिलाएं। 3.1.8.

3.2.8. पीएच 9.6 के साथ मध्यम मांस-पेप्टोन शोरबा:

GOST 10444.1 के अनुसार तैयार मांस-पेप्टोन शोरबा में, पीएच को GOST 10444.1 के अनुसार क्षार और एसिड समाधान का उपयोग करके समायोजित किया जाता है ताकि नसबंदी के बाद यह 25 डिग्री सेल्सियस पर 9.6 हो। माध्यम को 20 मिनट के लिए (121+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर रोगाणुरहित किया जाता है।

3.2.9. 6.5% सोडियम क्लोराइड युक्त मांस-पेप्टोन शोरबा माध्यम GOST के अनुसार तैयार किया जाता है

10444.1, लेकिन तैयारी के दौरान माध्यम के प्रति 1 डीएम 3 में अतिरिक्त सोडियम क्लोराइड की मात्रा 65 ग्राम तक बढ़ा दें।

3.2.10. सुक्रोज के साथ पोषक तत्व अगर माध्यम:

मांस-पेप्टोन शोरबा के 1 डीएम 3 में 100.0 ग्राम सुक्रोज, 15.0 ग्राम अगर मिलाया जाता है, कभी-कभी हिलाते हुए, मिश्रण को उबालने के लिए गर्म किया जाता है और सभी घटक पूरी तरह से घुल जाते हैं।

माध्यम को 45-55 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा किया जाता है और पीएच को समायोजित किया जाता है ताकि नसबंदी के बाद यह 25 डिग्री सेल्सियस (7.1 + 0.1) पर हो।

माध्यम को फ्लास्क में डाला जाता है और (121+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 15 मिनट के लिए निष्फल किया जाता है। स्टरलाइज़ेशन और पीएच की जांच के बाद, माध्यम को अच्छी तरह मिलाया जाता है और पेट्री डिश में डाला जाता है, 14 दिनों से अधिक के लिए (4+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर संग्रहीत किया जाता है।

3.2.11. रेड्डी का माध्यम: मध्यम आधार - 15.0 ग्राम अगर को 500 सेमी 3 आसुत जल वाले फ्लास्क में मिलाया जाता है और पानी के स्नान में तब तक गर्म किया जाता है जब तक कि आगर घुल न जाए। 500 सेमी 3 आसुत जल वाले एक अन्य फ्लास्क में, 10.0 ग्राम पोटेशियम साइट्रेट और 15.0 ग्राम कार्बोक्सिलमिथाइलसेलुलोज डालें और गर्म करके घोलें। दोनों फ्लास्क की सामग्री को मिलाया जाता है और 3.0 ग्राम पेप्टोन, 25 सेमी 3 खमीर अर्क, 1.25 ग्राम पोटेशियम फॉस्फेट, 5.0 ग्राम एल-आर्जिनिन हाइड्रोक्लोराइड मिलाया जाता है, पानी के स्नान में गर्म किया जाता है जब तक कि घटक पूरी तरह से घुल न जाएं, ठंडा किया जाए। 45-55 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर और पीएच को समायोजित करें ताकि नसबंदी के बाद यह 25 डिग्री सेल्सियस (6.3 ± 0.2) पर हो। मीडियम बेस को (121+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 15 मिनट के लिए निष्फल किया जाता है और (4+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 30 दिनों से अधिक समय तक संग्रहीत नहीं किया जाता है।

पोषक तत्व माध्यम तैयार करने के लिए, 5.0 सेमी 3 बाँझ स्किम दूध, 100 सेमी 3 कैल्शियम कार्बोनेट का निलंबन 30 ग्राम/डीएम 3 की द्रव्यमान सांद्रता के साथ और 2 सेमी 3 ब्रोमोक्रेसोल पर्पल का घोल 1 की द्रव्यमान सांद्रता के साथ मिलाएं। डीएम 3 को पिघलाकर 45-55 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा किया गया, बेस 1 ग्राम/डीएम 3।

3.2.12. तरल रोगोसा माध्यम: 10.0 ग्राम पेप्टोन को 1.0 डीएम 3 की क्षमता वाले वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में रखा जाता है।

25.0 सेमी 3 खमीर अर्क, 20.0 ग्राम ग्लूकोज, 1.0 सेमी 3 ट्वीन - 80, 6.0 ग्राम पोटेशियम फॉस्फेट मोनोसुबस्टिट्यूटेड, 2.0 ग्राम अमोनियम साइट्रेट, 25.0 ग्राम सोडियम एसीटेट, 1.32 सेमी 3 ग्लेशियल एसिटिक एसिड एसिड, 0.575 ग्राम मैग्नीशियम सल्फेट का 0.12 ग्राम, मैंगनीज सल्फेट का 0.12 ग्राम (MnS0 4 2H 2 0), 0.034 ग्राम आयरन सल्फेट, आसुत जल को निशान में जोड़ें, पानी के स्नान में गर्म करके घटकों को भंग करें और पीएच को समायोजित करें ताकि नसबंदी के बाद यह बराबर हो 25 डिग्री सेल्सियस (5.4+0.1). माध्यम को 10 सेमी 3 में बाँझ परीक्षण ट्यूबों में डाला जाता है और 15 मिनट के लिए (121+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है। पोषक माध्यम वाले टेस्ट ट्यूबों को 30 दिनों से अधिक समय तक (4+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर संग्रहित किया जाता है।

3.2.13. रोगोसा अगर माध्यम i में वर्णित विधि के अनुसार तैयार किया जाता है। 3.2.12, जोड़ के साथ

20.0 ग्राम आगर. घटकों को घोलने के बाद, माध्यम को बाँझ फ्लास्क में डाला जाता है और 15 मिनट के लिए (121+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है। तैयार माध्यम को (4+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 30 दिनों से अधिक समय तक संग्रहीत नहीं किया जाता है।

3.2.14. टमाटर का रस माध्यम GOST 10444.1 के अनुसार तैयार किया जाता है।

3.2.15. स्यूडोकैटलेज़ के निर्धारण के लिए माध्यम: 1 डीएम 3 की क्षमता वाले वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में रखें

5.0 पेप्टोन, 25 सेमी 3 खमीर अर्क, 0.5 सेमी 3 ट्वीन - 80, 0.1 ग्राम (एमएनएस0 4 4एच 2 0), 0.5 ग्राम ग्लूकोज, 15 ग्राम अगर, निशान पर मांस-पेप्टोन शोरबा जोड़ें, गर्म करके घटकों को भंग करें पानी से स्नान करें और pH को इस प्रकार समायोजित करें कि स्टरलाइज़ेशन के बाद यह 25°C (6.9 + 0.1) पर रहे। माध्यम को 5-7 सेमी3 की टेस्ट ट्यूब में डाला जाता है और 15 मिनट के लिए (121+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है। स्टरलाइज़ेशन के बाद, शॉल्स प्राप्त करने के लिए ट्यूबों को एक झुकी हुई सतह पर रखा जाता है।

3.2.16. ली पर्यावरण:

माध्यम का आधार - 10.0 ग्राम पेप्टोन, 50 सेमी 3 खमीर अर्क, 5.0 ग्राम लैक्टोज, 3.0 ग्राम कैल्शियम कार्बोनेट, GOST 10444.1 के अनुसार निष्फल, 0.5 ग्राम Na 2 HP0 4 को एक क्षमता वाले वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में रखा जाता है। 1 डीएम 3, 18 ग्राम अगर, निशान पर आसुत जल मिलाएं, पानी के स्नान में गर्म करके घटकों को घोलें और पीएच को समायोजित करें ताकि नसबंदी के बाद यह 25 डिग्री सेल्सियस (7.0 ± 1) पर हो। माध्यम को एक आटोक्लेव में (121+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 20 मिनट के लिए निष्फल किया जाता है और, यदि आवश्यक हो, तो 30 दिनों से अधिक के लिए (4+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर संग्रहीत किया जाता है।

पोषक तत्व माध्यम तैयार करने के लिए, 1 ग्राम/डीएम 3 की द्रव्यमान सांद्रता वाले ब्रोमोक्रेसोल पर्पल के बाँझ घोल के 20 सेमी 3 को आधार के 1 डीएम 3 में मिलाया जाता है, मिश्रित किया जाता है और पेट्री डिश में डाला जाता है। माध्यम को (4+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 7 दिनों से अधिक समय तक संग्रहीत नहीं किया जाता है।

3.3. किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर संस्कृतियों, जीवाणु सांद्रता और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी के परीक्षण के लिए पोषक तत्व मीडिया की तैयारी

3.3.1. हाइड्रोलाइज्ड दूध तैयार करना

प्राकृतिक या पुनर्गठित मलाई रहित दूध को 20 मिनट तक उबाला जाता है या बहती भाप से उपचारित किया जाता है और (45+2) डिग्री सेल्सियस के तापमान तक ठंडा किया जाता है। सक्रिय अम्लता को 40% NaOH के द्रव्यमान अंश के साथ एक जलीय घोल जोड़कर pH (7.7+0.1) पर समायोजित किया जाता है। 1000 सेमी 3 दूध में 0.5 से 1.0 ग्राम पैनक्रिएटिन पाउडर मिलाया जाता है। फिर दूध में 5 से 6 सेमी 3 क्लोरोफॉर्म मिलाया जाता है। फ्लास्क को कॉर्क स्टॉपर से बंद कर दिया जाता है और 18-24 घंटों के लिए (40+2) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर रखा जाता है। पहले 3-5 घंटों के दौरान, दूध को 2-3 बार हिलाया जाता है (स्टॉपर को थोड़ा बाद में खोला जाता है)। क्लोरोफॉर्म हटाने के लिए हिलाना)।

फिर हाइड्रोलाइज्ड दूध को एक पेपर फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है, 1: 1 के अनुपात में आसुत जल से पतला किया जाता है, सक्रिय अम्लता पीएच को समायोजित किया जाता है (7.1 + 0.1), NaOH 40% के द्रव्यमान अंश के साथ एक जलीय घोल मिलाया जाता है और उपयोग किया जाता है हाइड्रोलाइज्ड दूध से अगर तैयार करें। भंडारण के मामले में, हाइड्रोलाइज्ड दूध को 15 मिनट के लिए (121+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है।

3.3.2. हाइड्रोलाइज्ड दूध से अगर तैयार करना

हाइड्रोलाइज्ड दूध, सेमी 3 - 1000;

आगर, जी - 15.

1000 सेमी 3 हाइड्रोलाइज्ड दूध में 15 ग्राम अगर मिलाएं। माध्यम को तब तक गर्म किया जाता है जब तक कि एगर पूरी तरह से पिघल न जाए और रूई के माध्यम से फ़िल्टर न हो जाए, टेस्ट ट्यूब या फ्लास्क में डाला जाए और एक आटोक्लेव में (121+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर (10+1) मिनट के लिए निष्फल कर दिया जाए।

3.3.3. बाँझ मलाई निकाला हुआ दूध तैयार करना

प्राकृतिक या पुनर्गठित मलाई रहित दूध को 10 सेमी 3 ट्यूबों में डाला जाता है और (121+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर (10+1) मिनट के लिए निष्फल किया जाता है।

4. परीक्षण का संचालन

4.1. खाद्य उत्पादों का परीक्षण (किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर कल्चर, जीवाणु सांद्रण और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी को छोड़कर)

4.1.1. सूक्ष्मजीवों का निर्धारण करने के लिए, उत्पाद के तैयार नमूने या उसके मूल तनुकरण का उपयोग करें।

पेट्री डिश पर सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति निर्धारित करने और उनकी संख्या की गणना करने के लिए, किसी खाद्य उत्पाद के नमूने से या किसी विशिष्ट के लिए नियामक और तकनीकी दस्तावेज में निर्दिष्ट सूक्ष्मजीवों की अनुमेय संख्या के अनुसार प्रारंभिक कमजोर पड़ने की एक श्रृंखला तैयार की जाती है। खाद्य उत्पाद का प्रकार.

खाद्य उत्पाद के नमूने से एनएफपी की गणना करने के लिए, प्रारंभिक और दस गुना तनुकरण की एक श्रृंखला तैयार करें ताकि उच्चतम तनुकरण की संस्कृतियों में सूक्ष्मजीवों का पता न चले। बुआई के लिए कम से कम तीन क्रमिक तनुकरणों का चयन किया जाता है। प्रत्येक तनुकरण से तीन समानांतर ट्यूबों को टीका लगाया जाता है।

4.1.2. एनएचएफ विधि का उपयोग करके तरल मीडिया में और गहरी विधि द्वारा पेट्री डिश पर बुआई के लिए, उत्पाद के तैयार नमूने का 1.0 सेमी 3 और (या) इसका पतलापन लिया जाता है, सतह विधि द्वारा पेट्री डिश पर बुआई के लिए - 0.1-0.2 सेमी 3.

गहरी या सतही विधियों के साथ-साथ झिल्ली निस्पंदन का उपयोग करके बुवाई GOST 26670 के अनुसार की जाती है।

झिल्ली फ़िल्टर विधि का उपयोग करते समय, तरल उत्पाद की मात्रा फ़िल्टर की जाती है, जो एक विशिष्ट प्रकार के खाद्य उत्पाद के लिए नियामक और तकनीकी दस्तावेज़ीकरण में इंगित की जाती है।

4.1.3. कम आवृत्ति वाले लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति या संख्या निर्धारित करने के लिए, पैराग्राफ में निर्दिष्ट तरल मीडिया में से एक पर टीकाकरण किया जाता है। 3.2.2, 3.2.6 या 3.2.12.

यदि, उत्पाद को ब्लिकफेल्ट माध्यम में जोड़ने के बाद, माध्यम का रंग बदल जाता है, तो मूल रंग बहाल होने तक 50 ग्राम/डीएम 3 की द्रव्यमान सांद्रता के साथ एक बाँझ क्षार समाधान (NaOH या KOH) की कुछ बूँदें जोड़ें।

लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति निर्धारित करने या उनकी संख्या की गणना करने के लिए, तरल मीडिया में बोने के बजाय, खंड 3.2.1, 3.2.5, 3.2.7 में निर्दिष्ट अगर मीडिया में से किसी एक में गहरी विधि का उपयोग करके टीका लगाने की अनुमति है। , 3.2.13 या 3.2.14.

जीनस लैक्टोबैसिलस के एनएचएफ बैक्टीरिया की उपस्थिति या संख्या निर्धारित करने के लिए, पैराग्राफ में निर्दिष्ट तरल मीडिया में से एक पर टीकाकरण किया जाता है। 3.2.6 या 3.2.12.

जीनस लैक्टोबैसिलस के जीवाणुओं की उपस्थिति निर्धारित करने या उनकी संख्या गिनने के लिए, तरल मीडिया में बोने के बजाय, पैराग्राफ में निर्दिष्ट अगर मीडिया में से किसी एक में गहरी विधि का उपयोग करके टीका लगाएं। 3.2.7 या 3.2.13.

जीनस ल्यूकोनोस्टोक के बैक्टीरिया की उपस्थिति निर्धारित करने के लिए, पैराग्राफ 3.2.4 में निर्दिष्ट तरल माध्यम पर टीकाकरण किया जाता है।

उपस्थिति का निर्धारण करने के लिए, एक तरल माध्यम का उपयोग करने के बजाय, साथ ही पेट्री डिश पर जीनस ल्यूकोनोस्टोक के बैक्टीरिया की संख्या की गणना करने या झिल्ली निस्पंदन विधि का उपयोग करने के लिए, पैराग्राफ 3.2.10 में निर्दिष्ट अगर माध्यम पर सतह विधि का उपयोग करके टीका लगाएं। .

जीनस स्ट्रेप्टोकोकस के समूह एन स्ट्रेप्टोकोकी की उपस्थिति निर्धारित करने या संख्या की गणना करने के लिए, खंड 3.2.11 में निर्दिष्ट अगर माध्यम में गहरी विधि का उपयोग करके टीकाकरण किया जाता है, और एस.थर्मोफिलस के लिए, खंड 3.2.16 के अनुसार माध्यम प्रयोग किया जाता है।

पेडियोकोकस जीनस के बैक्टीरिया की उपस्थिति या संख्या निर्धारित करने के लिए, पैराग्राफ 3.2.3 में निर्दिष्ट अगर माध्यम में गहरी विधि का उपयोग करके टीकाकरण किया जाता है।

4.1.4. लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति निर्धारित करने या उनकी संख्या की गणना करने के लिए संस्कृतियों, जीनस स्ट्रेप्टोकोकस के समूह एन के जीनस लैक्टोबैसिलस स्ट्रेप्टोकोकी के बैक्टीरिया को (30+1) डिग्री सेल्सियस या इससे अधिक के तापमान पर 5 दिनों से अधिक नहीं रखा जाता है। (37+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 3 दिन; जीनस ल्यूकोनोस्टोक के जीवाणुओं की उपस्थिति निर्धारित करने या उनकी संख्या गिनने के लिए फसलों को (22+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 5 दिनों से अधिक नहीं रखा जाता है। एस.थर्मोफिलस की उपस्थिति निर्धारित करने या संख्या की गणना करने के लिए टीकाकरण (45+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर (48+3) घंटे लगाए जाते हैं। जीनस ल्यूकोनोस्टोक के जीवाणुओं की उपस्थिति या गिनती निर्धारित करने के लिए पेट्री डिश पर टीकाकरण नीचे की ओर से किया जाता है।

दृश्य लक्षण दिखाई देने पर तरल मीडिया में फसलों का ऊष्मायन रोक दिया जाता है

अगर मीडिया पर कॉलोनियों की प्रारंभिक गणना 48 घंटों के बाद की जाती है।

4.1.5. अगर मीडिया पर फसलों में लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति निर्धारित करने या उनकी संख्या की गणना करने के लिए, जीनस लैक्टोबैसिलस के बैक्टीरिया, जीनस स्ट्रेप्टोकोकस के समूह एन के पेडियोकोकस स्ट्रेप्टोकोकी, एस.थर्मोफिलस, पहुंच GOST 30425 या निम्नलिखित में से एक के अनुसार सीमित है तरीके:

पेट्री डिश में जमे हुए पोषक माध्यम पर 5.0 सेमी 3 की मात्रा में पिघले और (45+1) डिग्री सेल्सियस तक ठंडा किए गए अगर माध्यम की दूसरी परत डालें और कठोर होने तक छोड़ दें;

पेट्री डिश को 95% एन 2 और 5% सीओ 2 युक्त गैस वातावरण में रखा जाता है;

पेट्री डिश को एनारोस्टेट में रखा जाता है। डिवाइस बंद है और वैक्यूम पंप का उपयोग करके 86.6-93.3 kPa का वैक्यूम बनाया जाता है;

लगभग 2 सेमी ऊंचा स्तंभ प्राप्त करने के लिए आवश्यक मात्रा में तरल माध्यम के साथ प्रत्येक परीक्षण ट्यूब में बाँझ तरल पैराफिन मिलाया जाता है।

4.1.6. तरल मीडिया पर कल्चर की प्रतिदिन जांच की जाती है और विकास के दृश्यमान संकेतों वाली नलियों का चयन किया जाता है। तरल मीडिया पर वृद्धि की प्रकृति परिशिष्ट 2 में दी गई है। वृद्धि के संकेतों के साथ परीक्षण ट्यूबों से, उपसंस्कृति को अगर मीडिया पर बैक्टीरियोलॉजिकल लूप के साथ किया जाता है (पैराग्राफ 4.1.3 देखें) ताकि पृथक कॉलोनियों की वृद्धि प्राप्त की जा सके। खंड 4.1.4 के अनुसार फसलें उगाई जाती हैं।

4.1.7. ऊष्मायन के बाद, अगर मीडिया पर टीकाकरण की जांच की जाती है और गिनती के लिए पेट्री डिश का चयन किया जाता है, जिस पर 15 से 150 विशिष्ट कॉलोनियां विकसित हुई हैं।

झिल्ली फिल्टर विधि का उपयोग करके सूक्ष्मजीवों की संख्या निर्धारित करते समय, यदि फिल्टर पर 15 से कम विशिष्ट कॉलोनियां विकसित हुई हैं, तो गिनती के लिए पेट्री डिश का चयन करने की अनुमति दी जाती है।

विशिष्ट उपनिवेशों की विशेषताएँ परिशिष्ट 2 में दी गई हैं।

4.1.8. यह पुष्टि करने के लिए कि विशिष्ट कॉलोनियां लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों या जेनेरा लैक्टोबैसिलस, ल्यूकोनोस्टोक, पेडियोकोकस, जीनस स्ट्रेप्टोकोकस, एस.थर्मोफिलस के समूह एन स्ट्रेप्टोकोकी में से किसी एक के बैक्टीरिया से संबंधित हैं, कम से कम 5 विशिष्ट कॉलोनियों को खंड 4.1 के अनुसार फसलों से चुना जाता है। 7 या 4.1.6. प्रत्येक चयनित कॉलोनी का कुछ सूक्ष्मजीवों से संबंध ग्राम धुंधलापन, गतिशीलता, कैटालेज़ की उपस्थिति के संबंध में स्थापित किया जाता है, इसके अतिरिक्त, ल्यूकोनोस्टोस जीनस के बैक्टीरिया की पहचान करते समय, स्ट्रेप्टोकोकी की पहचान करते समय कैप्सूल की उपस्थिति निर्धारित की जाती है;

जीनस स्ट्रेप्टोकोकस के समूह एन की प्रजाति एस.थर्मोफिलस और स्ट्रेप्टोकोकी - पीएच 9.6 के साथ मांस-पेप्टोन शोरबा में और 6.5% NaCl के साथ मांस-पेप्टोन शोरबा में वृद्धि की उपस्थिति।

4.1.8.1. ग्राम स्टेनिंग में सूक्ष्मजीवों का अनुपात निर्धारित करने के लिए, कॉलोनियों से स्मीयर तैयार किए जाते हैं, जिन्हें GOST 30425 के अनुसार स्टेन किया जाता है और सूक्ष्मदर्शी रूप से जांच की जाती है।

4.1.8.2. कालोनियों से सूक्ष्मजीवों की गतिशीलता का अध्ययन करने के लिए, हैंगिंग या क्रश्ड ड्रॉप विधि का उपयोग करके तैयारी तैयार की जाती है और सूक्ष्मदर्शी से जांच की जाती है। माइक्रोस्कोपी के परिणामों का मूल्यांकन परिशिष्ट 1 के अनुसार किया जाता है।

4.1.8.3. फसलों की कैटालेज़ गतिविधि GOST 30425 के अनुसार निर्धारित की जाती है।

कैटालेज़ गतिविधि के निर्धारण के परिणामों का मूल्यांकन परिशिष्ट 1 के अनुसार किया जाता है।

जीनस पेडियोकोकस के बैक्टीरिया में हाइड्रोजन पेरोक्साइड का अपघटन एंजाइम स्यूडोकैटलेज़ के कारण संभव है। इसलिए, लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों या जीनस पेडियोकोकस के बैक्टीरिया का निर्धारण करते समय, यदि सकारात्मक कैटालेज़ प्रतिक्रिया देने वाले ग्राम-पॉजिटिव, गैर-गतिशील सूक्ष्मजीव विशिष्ट कॉलोनियों में पाए जाते हैं, तो साइटोक्रोम की अनुपस्थिति को बेंज़िडाइन परीक्षण करके नियंत्रित किया जाता है। ऐसा करने के लिए, पेट्री डिश पर उगे 24-48 घंटे पुराने बैक्टीरिया की कॉलोनियों को i में बताए गए बेंज़िडाइन घोल के साथ डाला जाता है। 3.1.9. घोल से कालोनियों को संतृप्त करने के बाद, कप में लगभग समान मात्रा में 5% हाइड्रोजन पेरोक्साइड मिलाया जाता है। जीनस पेडियोकोकस के बैक्टीरिया सहित लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों में साइटोक्रोम नहीं होते हैं। जब साइटोक्रोम मौजूद होते हैं, तो कॉलोनियां नीली-हरी या चमकीली नीली दिखाई देती हैं।

बेंज़िडाइन की अनुपस्थिति में, माध्यम पर स्यूडोकैटलेज़ की उपस्थिति निर्धारित करने की अनुमति है। 3.2.15 कम ग्लूकोज सांद्रता के साथ - 0.05%।

I के अनुसार फसलें उगाई जाती हैं। 4.1.4, स्यूडोकैटलेज़ का निर्धारण GOST 30425 के अनुसार कैटालेज़ की तरह ही किया जाता है।

स्यूडोकैटलेज़ उत्पन्न करने वाली संस्कृतियाँ पेडिओकोकस जीनस से संबंधित हैं।

4.1.8.4. जीनस ल्यूकोनोस्टोक के बैक्टीरिया की पहचान करते समय, बैक्टीरिया कैप्सूल की पहचान करने के लिए बरी के अनुसार तैयारी तैयार की जाती है और दाग दिया जाता है। ऐसा करने के लिए, एक अच्छी तरह से डीग्रीज़ किए गए और पके हुए ग्लास स्लाइड पर बैक्टीरिया कल्चर की एक बूंद को बारीक काली स्याही पाउडर या निग्रोसिन सस्पेंशन के साथ मिलाएं।

पॉलिश किए हुए किनारों वाले दूसरे ग्लास का उपयोग करके, एक पतला स्मीयर जल्दी से तैयार किया जाता है, जिसे बर्नर की लौ से कई बार गुजारकर ठीक किया जाता है। स्मीयर को क्रिस्टल वायलेट के घोल या कार्बोल्फुचिन के कार्यशील घोल से रंगा जाता है। पानी के साथ एक बर्तन में सावधानी से धोएं, सूखने के लिए हवा में छोड़ दें और माइक्रोस्कोप के नीचे जांच करें। फिल्टर पेपर की शीटों के बीच स्मीयर को न सुखाएं। तैयारी की पृष्ठभूमि को काली स्याही या निग्रोसिन के पतले निलंबन से चित्रित किया गया है। जीवाणुओं के शरीर एकवर्णी रूप से रंगे होते हैं, कैप्सूल दाग रहित रहते हैं।

4.1.8.5. जीनस स्ट्रेप्टोकोकस के समूह एन स्ट्रेप्टोकोकी, एस थर्मोफिलस प्रजाति के स्ट्रेप्टोकोकी की पहचान करते समय, 9.6 के पीएच के साथ मांस-पेप्टोन शोरबा में वृद्धि की अनुपस्थिति और 6.5% सोडियम क्लोराइड युक्त मांस-पेप्टोन शोरबा में वृद्धि की अनुपस्थिति निर्धारित की जाती है।

इस उद्देश्य के लिए, संस्कृति और के अनुसार। 4.1.8 पीआई में दर्शाए गए मीडिया पर उपसंस्कृत हैं। 3.2.8 और 3.2.9.

फसलों को 3 दिनों के लिए (30+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर और पहचाने जाने पर ऊष्मायन किया जाता है

एस. थर्मोफिलस फसलों को 3 दिनों के लिए (45+1) डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है।

4.2. किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर कल्चर, जीवाणु सांद्रण और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी का परीक्षण करना

4.2.1. GOST 9225 के अनुसार किण्वित दूध उत्पादों (सूखा और तरल) के मिश्रण की तैयारी।

स्टार्टर कल्चर, बैक्टीरियल सांद्रण और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की बैक्टीरियल तैयारी तैयार करने के लिए, बोतल और बैग के किनारों को अल्कोहल से पोंछा जाता है, बोतल के किनारे को जला दिया जाता है और स्टॉपर हटा दिया जाता है, बैग के किनारे को काट दिया जाता है ज्वलनशील कैंची, 1 ग्राम परीक्षण सामग्री को एक बाँझ या ज्वलनशील मोर्टार में तौला जाता है, पेट्री डिश या बाँझ कागज के ढक्कन से ढक दिया जाता है, अच्छी तरह से पीस लिया जाता है, 99 सेमी वाले फ्लास्क से थोड़ी मात्रा में सोडियम क्लोराइड समाधान या फॉस्फेट बफर मिलाया जाता है। समाधान या बफर के 3. निलंबित सामग्री को शेष सोडियम क्लोराइड या फॉस्फेट बफर समाधान के साथ एक फ्लास्क में डाला जाता है और 1:100 का दूसरा तनुकरण प्राप्त किया जाता है।

और किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर कल्चर, बैक्टीरियल सांद्रण और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी के दूसरे तनुकरण के लिए, तालिका का उपयोग करके नियामक और तकनीकी दस्तावेज में निर्दिष्ट लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की संख्या के अनुसार निम्नलिखित तनुकरण तैयार करें। 1.

तालिका नंबर एक

4.2.2. लैक्टिक एसिड स्ट्रेप्टोकोकी की संख्या की गणना करने के लिए टीकाकरण पाई के अनुसार तैयार अगर या तरल पोषक माध्यम में किया जाता है। 3.3.2 और 3.3.3, और लैक्टिक एसिड छड़ों की संख्या की गणना करने के लिए बुवाई - खंड 3.3.3 के अनुसार तैयार तरल माध्यम में।

अगर पोषक माध्यम में बुआई के लिए, उन तनुकरणों का चयन करें, जो बोने पर, प्लेटों पर 15 से 150 कालोनियों तक बढ़ जाते हैं।

प्रत्येक नमूने को GOST 9225 के अनुसार पेट्री डिश पर उत्पाद के संबंधित तनुकरण के 1 सेमी 3 (तालिका 1 देखें) के साथ टीका लगाया जाता है।

पिछले तीन से चार तनुकरण (तालिका 1 देखें) को तरल पोषक माध्यम में बोते समय, प्रत्येक तनुकरण का 1 सेमी 3 बाँझ मलाई रहित दूध के साथ दो समानांतर ट्यूबों में डालें।

4.2.3. कल्चर वाली टेस्ट ट्यूब या पेट्री डिश को थर्मोस्टेट में रखा जाता है और मेसोफिलिक लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की गिनती के लिए (30+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर, थर्मोफिलिक लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की गिनती के लिए (40+1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर इनक्यूबेट किया जाता है और मेसोफिलिक और थर्मोफिलिक लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की संयुक्त गणना के लिए (32+1) डिग्री सेल्सियस पर। फसलों को 72 घंटों तक ऊष्मायन किया जाता है।

5. प्रसंस्करण परिणाम

5.1. खाद्य उत्पाद विश्लेषण परिणामों का प्रसंस्करण (किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर संस्कृतियों, जीवाणु सांद्रता, लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी को छोड़कर)

5.1.1. खाद्य उत्पाद विश्लेषण के परिणामों का प्रत्येक नमूने के लिए अलग से मूल्यांकन किया जाता है।

5.1.2. यदि, निर्धारित करते समय सांस्कृतिक, रूपात्मक और जैव रासायनिक गुणों का अध्ययन करते समय:

लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीव, ग्राम-पॉजिटिव, नॉन-मोटाइल, कैटालेज-नेगेटिव रॉड्स या नॉन-बीजाणु-गठन, ग्राम-पॉजिटिव, नॉन-मोटाइल, कैटालेज-नेगेटिव या स्यूडोकैटलेज-गठन करने वाले कोक्सी पाए जाते हैं, तो हम निष्कर्ष निकालते हैं कि पता लगाए गए सूक्ष्मजीव संबंधित हैं लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों के लिए;

जीनस लैक्टोबैसिलस के बैक्टीरिया गैर-बीजाणु-निर्माण, ग्राम-पॉजिटिव, गैर-गतिशील, कैटालेज-नकारात्मक छड़ पाए गए, तो यह निष्कर्ष निकाला गया कि पाए गए सूक्ष्मजीव जीनस लैक्टोबैसिलस से संबंधित हैं;

जीनस ल्यूकोनोस्टोक के बैक्टीरिया गैर-बीजाणु-गठन, ग्राम-पॉजिटिव, गैर-गतिशील, कैटालेज़-नकारात्मक पाए गए, जो एक कोक्सी कैप्सूल से घिरे हुए थे, तो हम निष्कर्ष निकालते हैं कि पाए गए सूक्ष्मजीव जीनस ल्यूकोनोस्टोक से संबंधित हैं;

जीनस स्ट्रेप्टोकोकस समूह एन के बैक्टीरिया गैर-बीजाणु-निर्माण, ग्राम-पॉजिटिव, गैर-गतिशील, कैटालेज-नकारात्मक, कोक्सी पाए गए, जो पीएच 9.6 और 6.5% NaCl के साथ पोषक तत्व मीडिया में नहीं बढ़ते हैं, यह निष्कर्ष निकाला गया है कि पाए गए सूक्ष्मजीव जीनस स्ट्रेप्टोकोकस समूह एन से संबंधित हैं;

जीनस पेडियोकोकस के बैक्टीरिया गैर-बीजाणु-निर्माण, ग्राम-पॉजिटिव, नॉनमोटाइल, कैटालेज-नेगेटिव (या कैटालेज-पॉजिटिव, लेकिन एक नकारात्मक बेंज़िडाइन परीक्षण दे रहे हैं) या स्यूडोकैटलेज़-पॉजिटिव कोक्सी पाए जाते हैं, तो हम निष्कर्ष निकालते हैं कि पाए गए सूक्ष्मजीव पेडियोकोकस जीनस से संबंधित हैं;

एस थर्मोफिलस प्रजाति के बैक्टीरिया गैर-बीजाणु-निर्माण, ग्राम-पॉजिटिव, गैर-गतिशील, कैटालेज-नकारात्मक, थर्मोफिलिक कोक्सी पाए गए जो पीएच 9.6 और 6.5% NaCl के साथ पोषक तत्व मीडिया में नहीं बढ़ते हैं, हम निष्कर्ष निकालते हैं कि पाए गए सूक्ष्मजीव स्ट्रेप्टोकोकस थर्मोफिलस प्रजाति के हैं।

5.1.3. यदि, जब 80% मामलों में विशिष्ट कालोनियों की पुष्टि हो जाती है, यानी 5 में से कम से कम 4 कालोनियों में, सूक्ष्मजीवों के कुछ समूहों या जेनेरा की वृद्धि की पुष्टि हो जाती है, तो यह माना जाता है कि डिश पर उगाई गई सभी विशिष्ट कालोनियां संबंधित हैं इस समूह, जीनस या प्रजाति के लिए। अन्य मामलों में, पुष्टि के लिए ली गई विशिष्ट कॉलोनियों की कुल संख्या में पुष्टि की गई कॉलोनियों के प्रतिशत के आधार पर सूक्ष्मजीवों की संख्या निर्धारित की जाती है।

5.1.4. एनएफपी का निर्धारण करते समय या किसी उत्पाद को तरल मीडिया पर टीका लगाते समय, ट्यूबों को सकारात्मक माना जाता है यदि, अगर मीडिया पर बाद के उपसंस्कृति और विशेषता कॉलोनियों की पुष्टि पर, परिभाषित समूहों, जेनेरा या प्रजातियों के सूक्ष्मजीव कम से कम एक विशेषता कॉलोनी में पाए जाते हैं।

5.1.5. GOST 30425 के अनुसार सूक्ष्मजीवों की सबसे संभावित संख्या (MPN) सकारात्मक ट्यूबों की संख्या से निर्धारित होती है।

यदि बुआई के लिए चयनित दस गुना तनुकरण अधिक था, उदाहरण के लिए 10_3, 10 -4 और 10 -5, तो एनएचएफ का सारणीबद्ध मान चयनित और सारणीबद्ध दसगुना तनुकरण के बीच के अंतर से गुणा किया जाता है, अर्थात 100 से।

यदि बुआई के लिए चुने गए दस गुना तनुकरण कम थे, उदाहरण के लिए 10° (1 ग्राम), 10 -1, 10 -2, तो सारणीबद्ध एनएचएफ मान को चयनित और सारणीबद्ध दस गुना तनुकरण के बीच के अंतर से विभाजित किया जाता है, है, 10 तक.

5.1.6. पेट्री डिश में या एनएचएफ विधि द्वारा या झिल्ली निस्पंदन विधि का उपयोग करके सूक्ष्मजीवों की संख्या निर्धारित करने के परिणामों को उत्पाद के प्रति 1 ग्राम या 1 सेमी 3 पर पुनर्गणना किया जाता है और GOST 26670 की आवश्यकताओं के अनुसार दर्ज किया जाता है।

5.1.7. उत्पाद के एक निश्चित नमूने में सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति का निर्धारण करने के परिणाम निम्नानुसार व्यक्त किए जाते हैं: उत्पाद के नमूने में लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीव (यदि आवश्यक हो, जीनस या प्रजाति का संकेत दिया गया है) का पता लगाया जाता है या नहीं पाया जाता है।

5.2. किण्वित दूध उत्पादों, स्टार्टर संस्कृतियों, जीवाणु सांद्रता और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की जीवाणु तैयारी के विश्लेषण के परिणामों को संसाधित करना।

5.2.1. जब लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया एक तरल माध्यम-दूध-में विकसित होते हैं तो दूध जम जाता है।

लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया (स्ट्रेप्टोकोक्की और बेसिली) की कुल संख्या की गणना करने के लिए, अंतिम तीन तनुकरण जिनमें दूध फटा है, को नोट किया जाता है।

एक संख्यात्मक विशेषता बनाओ. इसमें तीन संख्याएँ होती हैं जो पिछले तीन तनुकरणों में फटे हुए दूध के साथ टेस्ट ट्यूबों की संख्या दर्शाती हैं। संख्यात्मक विशेषता का पहला अंक उस तनुकरण से मेल खाता है जिस पर दूध दो परखनलियों में जम गया। निम्नलिखित संख्याएँ बाद के दो तनुकरणों में फटे हुए दूध के साथ टेस्ट ट्यूबों की संख्या दर्शाती हैं।

तालिका के अनुसार संख्यात्मक विशेषताओं के अनुसार। 2 लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीवों की सबसे संभावित संख्या ज्ञात करें, जो उस तनुकरण से गुणा होती है जिससे संख्यात्मक विशेषता का पहला अंक शुरू होता है।

तालिका 2

अस्वीकार्य संयोजन तालिका में शामिल नहीं हैं.

परिणामी संख्या उत्पाद के 1 ग्राम या 1 सेमी 3 में लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया कोशिकाओं की संख्या से मेल खाती है।

जब दो समानांतर ट्यूब संक्रमित होते हैं तो सूक्ष्मजीवों की सबसे संभावित संख्या की गणना करने का एक उदाहरण परिशिष्ट 3 में दिया गया है।

यदि स्ट्रेप्टोकोकी और बेसिली की संख्या में अंतर करना आवश्यक है, तो जिन टेस्ट ट्यूबों में दूध फट गया है, उनमें से GOST 9225 के अनुसार एक सूक्ष्म तैयारी करें, इसकी जांच करें और उन टेस्ट ट्यूबों को अलग से चिह्नित करें जिनमें बेसिली और स्ट्रेप्टोकोकी हैं।

लैक्टिक एसिड स्ट्रेप्टोकोकी या बेसिली की संख्या की गणना ऊपर बताए अनुसार की जाती है।

5.2.2. अगर माध्यम पर लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की विकसित कॉलोनियों की संख्या की गणना करना और उत्पाद के 1 ग्राम या 1 सेमी 3 में उनकी सामग्री की पुनर्गणना GOST 9225 के अनुसार की जाती है।

परिशिष्ट 1 संदर्भ

सूक्ष्मजीवों के लक्षण

सूक्ष्मजीवों का नाम

विशेषता

लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीव (GOST 30425 के अनुसार पहचाने गए जीनस स्पोरोलैक्टो-बैसिलस के अपवाद के साथ)

लैक्टोबैसिलस जीनस के बैक्टीरिया

जीनस ल्यूकोनोस्टोक के कीचड़ बनाने वाले बैक्टीरिया

जीनस स्ट्रेप्टोकोकस का समूह एन स्ट्रेप्टोकोक्की

जीनस पेडियोकोकस के बैक्टीरिया

स्ट्रेप्टोकोकस प्रजाति एस.थर्मोफिलस

गैर-बीजाणु-गठन, ग्राम-पॉजिटिव, गैर-गतिशील, कैटालेज-नकारात्मक छड़ें या गैर-बीजाणु-गठन, ग्राम-पॉजिटिव, गैर-गतिशील, कैटालेज-नकारात्मक या स्यूडोकैटलेज-गठन कोक्सी

ग्राम-पॉजिटिव, गैर-बीजाणु बनाने वाली छोटी या लंबी, गैर-गतिशील, कैटालेज़-नकारात्मक छड़ें

ग्राम-पॉजिटिव, गैर-बीजाणु-गठन, गोलाकार या अंडाकार आकार, जोड़े में या श्रृंखलाओं में व्यवस्थित, एक कैप्सूल से घिरा हुआ है जो ग्राम के लिए दाग नहीं करता है, गैर-गतिशील कैटालेज़-नकारात्मक कोक्सी

ग्राम-पॉजिटिव, गैर-बीजाणु-गठन, छोटी और लंबी श्रृंखलाओं में व्यवस्थित, गैर-गतिशील, कैटालेज-नकारात्मक, पीएच 9.6 और 6.5% NaCl कोक्सी के साथ पोषक तत्व मीडिया में नहीं बढ़ रहा है ग्राम-पॉजिटिव, गैर-बीजाणु-गठन, में व्यवस्थित जोड़े और टेट्राड, गैर-गतिशील, कैटालेज़-नकारात्मक या स्यूडोकैटलेज़-गठन कोक्सी

ग्राम-पॉजिटिव, जोड़े में या छोटी या लंबी श्रृंखलाओं के रूप में व्यवस्थित, गैर-गतिशील, कैटालेज़-नेगेटिव, थर्मोफिलिक कोक्सी जो 9.6 और 6.5% NaCl के पीएच के साथ पोषक तत्व मीडिया में नहीं बढ़ते हैं।

परिशिष्ट 2 सूचना

कृषिकृत पर लैक्टिक एसिड सूक्ष्मजीव कालोनियों की विशेषताएं और तरल मीडिया पर विकास की प्रकृति

परिशिष्ट 3 सूचना

लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की सबसे संभावित संख्या की गणना का उदाहरण

सीमित तनुकरण विधि द्वारा

लिया गया पतलापन................... 1: 10 1: 100 1: 1000 1: 10000

कल्चर वाली टेस्ट ट्यूबों की संख्या.......... 2 2 2 2

फटे हुए दूध के साथ परखनलियों की संख्या.2 2 1 1

एक संख्यात्मक विशेषता बनाओ. इसमें तीन संख्याएँ होती हैं जो पिछले तीन तनुकरणों में फटे मलाई रहित दूध के साथ टेस्ट ट्यूबों की संख्या दर्शाती हैं। संख्यात्मक विशेषता का पहला अंक (बाईं ओर) 2 है (1:100 तनुकरण की 2 परीक्षण ट्यूबें लपेटी गईं), दूसरा 1 है और तीसरा 1 है।

इसलिए, संख्यात्मक विशेषता 211 होगी। यह तालिका से मेल खाती है। 2 नंबर 13.0. इस संख्या को उस तनुकरण से गुणा किया जाना चाहिए जिससे संख्यात्मक विशेषता का पहला अंक शुरू हुआ (उदाहरण में, यह तनुकरण 1:100 है)।

इस प्रकार, 1 सेमी3 में 1300 लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया (13.0x100 = 1300) होते हैं।

तनुकरण द्वारा गुणा करने पर हमें 1 सेमी3 में स्ट्रेप्टोकोक्की की संख्या - 7000, छड़ें - 250 प्राप्त होती है।

सूचना डेटा

1. यूएसएसआर के राज्य कृषि उद्योग द्वारा विकसित और प्रस्तुत किया गया

2. उत्पाद गुणवत्ता प्रबंधन और मानकों के लिए यूएसएसआर राज्य समिति के दिनांक 28 नवंबर, 1989 नंबर 3502 के संकल्प द्वारा अनुमोदित और लागू किया गया।

3. GOST 10444.11-75 के स्थान पर

4. संदर्भ विनियामक और तकनीकी दस्तावेज़

5. अंतरराज्यीय मानकीकरण, मेट्रोलॉजी और प्रमाणन परिषद (एनयूएस 11-12-94) के प्रोटोकॉल नंबर 5-94 के अनुसार वैधता अवधि हटा दी गई थी।

6. पुनर्प्रकाशन. अप्रैल 2010